• Minute™ 动物脂肪组织及细胞总蛋白提取试剂盒 AT-022_CN.pdf

产品信息

产品描述

      脂肪组织特别是白色脂肪组织（WAT）已经被证实除了具有能量储存功能外，还与内分泌和器官炎症有关。从脂肪组织中提取和分析蛋白质对于了解许多生理/病理状态越来越重要。但是由于白色脂肪组织（WAT）和棕色脂肪组织（BAT）中高脂肪和低蛋白含量，所以在技术上极具挑战性。众所周知目前生物样品中水油乳化物最难分离，我公司研发的具有独特表面性质的带孔径的离心管柱和优化的无表面活性剂的缓冲液系统，可以快速有效的从脂肪组织匀浆中将水油乳化物分离。提取缓冲液比脂肪组织中的油冰点低，脂肪组织匀浆通过离心管柱能将水相和油相迅速分开，组织中的总蛋白无丢失。蛋白质得率可达2-3 mg/ml，远远高于其他方法。是世界上唯一一款脂肪蛋白提取商业试剂盒。

应用

      可应用于2-D、ELISA、SDS-PAGE、 immunoblottings、 IP、酶活性检测及其他应用。

使用说明

从脂肪组织中提取蛋白（白色脂肪组织或棕色脂肪组织）

1.将缓冲液 A，离心管柱和接收管套管放置于冰上预冷。

2.秤取 50-80mg 新鲜或冷冻脂肪组织，把它放在几层纸巾上，用拇指和食指挤压，从组织中去除一部分油。用镊子将组

织放入试剂盒提供的 1.5ml 离心管中（注意：此处离心管必须使用试剂盒配备 1.5ml 离心管），秤取 100mg 蛋白提取

粉加入样品中。加入 50ul 缓冲液 A。

3.用研磨棒扭转研磨组织样品 1-2 分钟成浆状。再加入 200-300ul 缓冲液 A，继续研磨样品 30秒钟。如果起始组织量较

小（20-40mg）需要加入 100-150ul 缓冲液 A。

4.盖上盖子， 350xg 离心 1 分钟。将上清液转移到放置在接收管里的离心管柱中（转移过程中脂肪碎片黏附管壁没有关

系）。研磨棒可以重复使用，用酒精擦拭清洁，空气干燥。

5.在-20℃，开盖孵育 15-20 分钟。（请确保冰箱温度在-20℃附近，否则参照下面的常见问题）

6.孵育后立刻 350xg，开盖离心 1-2 分钟。弃去离心管柱，所得为脂肪组织中的总蛋白。提取出的蛋白中含有少量不溶物

为非水溶性细胞组分。可以将其稀释后直接用于 ELISA 检测水溶性蛋白。也可以用缓冲液 B 或 C 重悬溶解非水溶性蛋白

用于下游应用：

A.在提取出的蛋白溶液中加入 1/10 缓冲液 B 成为变性蛋白溶液（用于 SDS-PAGE，Western 和其他应用）

B.在提取出的蛋白溶液中加入 1/10 缓冲液 C 成为非变性蛋白溶液（用于 IP，ELISA 和其他应用）

C.用 2x 的 2D 胶样品缓冲液溶解用于 2D 分析。

注意：缓冲液 A 中含有可能会干扰质谱分析的成分。如果提取的蛋白用于质谱分析，在提取后 需透析缓冲液，或者用

TCA 法沉淀蛋白。

从脂肪细胞中提取蛋白

1.低速离心收集 30-50 x106 脂肪细胞。在 1.5ml 离心管中加入 1ml 预冷的 PBS（可根据上述建议加入磷酸酶抑制剂

或者蛋白酶抑制剂）重悬细胞。加入 80mg 蛋白提取粉。

2.500xg 离心 3-5 分钟，弃去上清液。用研磨棒扭转研磨 1-2 分钟使细胞匀浆。加入 200-300ul缓冲液 A，继续研磨

30 秒。

3.350xg 离心 1 分钟，然后将上清液转移到预冷的离心管柱接收管套管中。接转以上步骤 5-6。

储存条件

Buffer A储存于4℃，其他部分15-30℃。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2）本产品仅作科研用途！