• 说明书丨HRN02421-全血RNA提取试剂盒.pdf

产品信息:

产品描述：

      本试剂盒可从新鲜全血中提取总RNA，对不同物种及多种不同抗凝剂的全血样品都适用，本产品采用高效、专一的RNA吸附柱，可以有效的去除杂质蛋白等。本试剂盒获得的RNA可以用于RT-PCR、芯片分析、NGS、Nortern Blot、Dot  Blot、Poly A筛选、体外转录和分子克隆等各类下游实验。

产品组成：

本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。

运输与保存：

1.各组分可在常温运输，其中RBC放4℃低温储存。

2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

注意事项：

1、第一次使用前请先在 Buffer RW1，Buffer RPE中添加指定量的无水乙醇，并做好标记，以免多次加入!

2、新鲜血液尽量用EDTA-Na2处理的采血管保存。

3、本试剂盒抑制RNA酶效果较好，所有离心步骤如未加说明，均可在常温进行。

4、需要自备乙醇、β-巯基乙醇或者DTT。

5、样品处理量不能超过离心柱的处理能力，否则容易导致DNA残留或者RNA产量降低

6、RLT和RW1中含有刺激性化合物，操作时务必戴手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

7、关于DNA的微量残留：

一般说来任何总 RNA 提取试剂在提取过程中无法完全避免 DNA 的微量残留（DNase 消化也无法做到 100%无残留），本公司的 RNA 提取产品，由于采取了本公司特殊的裂解液体系和离心管吸附柱技术，绝大多数 DNA 已经被清除，不需要 DNase 消化，可直接用于RT- PCR 和qPCR。个别特殊情况如 DNA 含量过于丰富造成残留或者要进行严格的mRNA 表达量分析荧光定量 PCR，我们建议在进行模板和引物的选择时：

（1）选用跨内含子的引物，以穿过 mRNA 中的连接区，这样 DNA 就不能作为模参与扩增反应。

（2）选择基因组 DNA 和 cDNA 上扩增的产物大小不一样的引物对。

（3）在步骤去蛋白液 RW1 漂洗前，直接在离心柱上进行 DNase I 柱上消化处理。购买 DNA 酶柱上消化试剂盒(货号：HRN0291)前可先索取具体操作说明书。

8、本产品仅作科研用途！

操作步骤：

提示：

→第一次使用前请先在 Buffer RW1，Buffer RPE中添加指定量的无水乙醇，并做好标记已加入乙醇，以免多次加入!

→在使用前加入10μL β-巯基乙醇或20μL的2M DTT到1mL Buffer RLT中，含有β-巯基乙醇或者DTT的裂解液可在室温下保存长达1个月

1、向1.5mL无菌的离心管中加入1mL RBC溶液。

2、加入500μL全血，上下颠倒混匀（请勿使用涡旋仪）。

3、在水平摇床或者旋转摇床上摇动10min（环境温度尽量控制在15℃-25℃之间）；或者

手动上下翻转离心管10min。

4、将离心管放置离心机中，以2500rpm （500×g）转速离心5min。

5、用移液器小心吸取上清液并丢弃。

6、加入1mL RBC溶液到离心管的白色颗粒中，通过“弹管”混匀，直到颗粒被重悬（不要使用涡旋仪）。

7、将离心管放置离心机中，以2500rpm（500×g）转速离心3min。

8、小心吸取并丢弃上清液，特别是在白色颗粒外表面形成的红色血细胞碎片环。

9、用200μL PBS重悬白色颗粒。

10、加入350 μL 裂解液Buffer RLT吹打混匀后用手剧烈振荡20秒，充分裂解。

11、组装好gDNA清除柱和收集管，将步骤10的溶液添加到gDNA清除柱中，12,000rpm离心2min。小心将收集管中的上清转移到新的离心管中（不要碰到收集管中的沉淀物）。

12、加入250μL 无水乙醇，立即吹打混匀。

13、将上述混合物加入到一个新的吸附柱中（吸附柱放入收集管中），12,000rpm离心60秒，弃废液，收集管重复使用。

14、加入700μL的 Buffer RW1到离心柱中，盖好盖子，12,000rpm离心15秒，弃废液，收集管重复使用。

15、加入500μL Buffer RPE到离心柱中，盖好盖子，12,000rpm离心15秒，弃废液，收集管重复使用。

16、重复一遍，加入500μL Buffer RPE到离心柱中，盖好盖子，12,000rpm离心2min（较长时间的离心，确保RNA洗脱过程中没有乙醇残留）。

*17、该步骤为可选择步骤，将离心柱装填到全新的2mL收集管中，盖好盖子，12,000rpm离心1min，可完全去除残留的Buffer RPE。

18、将离心柱放置到全新的1.5mL离心管中，向离心柱的膜中央加入30-50μL的无酶水，盖好盖子，12,000rpm离心1min，洗脱收集RNA。

说明：如果预期RNA产量＞30μg，另外再加入30-50μL的无酶水到离心柱中，重复步骤18，合并两次洗脱液；如果需要高浓度的RNA，建议将第一次的洗脱液加回到离心柱上，重复步骤18。

洗脱两遍RNA的洗脱液的RNA浓度高，分两次洗脱合并洗脱液的RNA产量比前者高15-30%

，但是浓度要低，使用者根据需要进行选择。