• Minute™ 植物叶绿体分离试剂盒 CP-011_CN.pdf

产品信息

产品描述

      叶绿体分离试剂盒中包含优化的叶绿体提取缓冲液和2.0ml离心管柱。利用带孔径的离心管柱技术可以快速从新鲜的植物组织中（叶片，种子，软茎等）提取完整的叶绿体。其他方法都需要1-10g组织来提取叶绿体，我们的试剂盒可以从100-200mg新鲜植物叶片中快速提取1 X 10⁶ - 1 X 10⁷ 的完整叶绿体（>90%完整），操作时间<5分钟。

应用

      提取出的叶绿体可以应用于生化分析，SDS-PAGE，immunoblottings，叶绿体酶测定等。叶绿体也可作为RNA和DNA纯化起始材料用于分子生物学研究。

使用说明

以下步骤是从 100-200mg 植物组织样品中（叶片，种子，软茎等）中分离完整的叶绿体。如果起始量较大或者较小，需按比例调整裂解液 A 的用量。实验前需将缓冲液 A 和 B 完全解冻放置冰上。

1.取 100－200mg 新鲜植物组织放入离心管柱套管中，植物叶片样品，剪碎，卷起或者折叠放入离心管柱套管中。用 200ul 吸头反复挤压约 100 次减小体积。种子或者软茎样品，用锋利的刀片将其切成小块放入离心管柱套管中。

2.加入 100ul 预冷的缓冲液 A（注意：缓冲液 A 使用前请反复摇匀）。用塑料研磨棒扭转研磨 100次（大概 2-3 分钟）（注意：塑料研磨棒可以重复使用，用蒸馏水彻底冲洗干净，用纸巾擦干）。再补加 300ul 缓冲液 A，用吸头混匀。

3.盖上盖子，4℃，2000Xg 离心 4 分钟取出（离心时间根据叶绿体大小决定，体积越小，时间越长），弃去离心管柱。将接收管中上清液弃去，加入 500ul 预冷的缓冲液 B 用吸头或涡旋震荡仪重悬沉淀。

4. 4℃，2000Xg 离心 5 分钟。弃去上清液，保留沉淀（沉淀为分离出的完整叶绿体）。叶绿体沉淀可以根据下游实验选择不同的缓冲液重悬。推荐使用下表中 MinuteTM系列溶解液溶解叶绿体。做等电聚焦（2D 凝胶第一维）我们建议使用：7M 尿素/2M 硫脲/2%Chaps 和 20mM DTT (使用前将 DTT 加入以上混合液中)。

可选操作：

叶绿体进一步纯化对于大多数样品，按照上述操作得到的叶绿体纯度可以满足绝大部分下游实验。然而一些样品，如果得到的叶绿体含有明显的细胞碎片，可以使用 Percoll 进行进一步纯化，

纯化步骤如下：

1. 在 1.5mlEP 管里加 300ul Percoll 和 700 ul 1xPBS 或者 TES，涡悬震荡混匀 10-20s。

2. 用 100ul 1xPBS 或者 TES 重悬第四步中得到的叶绿体沉淀，将得到的重悬液吹到 Percoll 溶液面上，4oC，11000Xg 离心 10 分钟。

3. 弃去上清，用 100ul 1xPBS 或 TES 重悬沉在管底的绿色沉淀之后将之转移到一个新的 EP 管中（不要冲洗管壁的绿沉淀）分离的叶绿体可以用 500ul 预冷 1xPBS 清洗沉淀去除残留的Percoll。

储存条件

-20℃下储存。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2）本产品仅作科研用途！