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产品描述

   BiolinkedinGST-Tag蛋白纯化试剂盒是GST蛋白纯化琼脂糖磁珠,经过优化预制的缓冲液以及15mL或50mL的磁力架组成，用于高效、快速纯化GST融合蛋白，具有简单，高效，纯度高，省事等特点。

注：

1. 使用前配制1X结合/洗涤液

按照9:1的比例混合适量结合/洗涤液，例如9mL超纯水和1mL10X结合/洗涤液混合，混合后的溶液即为1X结合/洗涤液缓冲液。

2.10XGSH溶液和洗脱缓冲液的配制

a. 10XGSH溶液的配制：将试剂盒提供的184mg GSH用6mL本试剂盒提供的洗脱缓冲液(需添加GSH)溶解并混匀，即为10XGSH溶液。配制好的10XGSH溶液-20℃保存，至少一年有效。

b. 洗脱缓冲液的配制：按照9:1的比例混合适量洗脱缓冲液(待添加GSH)和10XGSH溶液，例如9mL洗脱缓冲液(待添加GSH)和1mL 10XGSH溶液混合，混合后的溶液即为洗脱缓冲液。由于GSH在溶液中容易被氧化而失效，洗脱缓冲液宜新鲜配制，配制好的洗脱缓冲液4℃保存，两周内有效。洗脱缓冲液的组分为50mM Tris, 10mM GSH, pH8.0.

使用说明

1.    样品准备

以大肠杆菌表达系统为例

1). 4℃离心30 min（4000 g）收集菌体，弃上清。

2). 用预冷1×PBS 重悬细胞, 如果需要，可加入适量的添加剂，如非离子去污剂（NP-40）或蛋白酶抑制剂（PMSF）等。

3). 用超声波破碎法在冰上破碎菌体，直到样品破碎完全。

4) 4℃离心20 min（12,000 g）,除菌过滤，并小心将上清和沉淀分离，然后用SDS-PAGE分析GST 融合蛋白的含量及可溶性。

2. 磁珠预处理

(1) 将GST蛋白纯化琼脂糖磁珠置于漩涡混匀器上充分混匀，用移液器取适量磁珠悬液于离心管中；

(2) 将离心管置于磁力架上，待溶液变澄清后，移去上清液；

(3) 加入等体积的结合/洗涤液到上述装有磁珠的离心管中，盖紧盖子，漩涡振荡 30s，使磁珠重新悬浮。将离心管置于磁力架上，磁性分离，移去上清液，重复洗涤 2 次。

3.   纯化重组GST融合蛋白

3.1 目的蛋白与磁珠结合

1). 将粗蛋白样品加入到装有预处理磁珠中；

2) 将上述离心管置于漩涡混匀器振荡15s，然后置于旋转混合仪上，2~8℃的低温环境下旋转混合20~30 min,如果需要可延长至2 h或过夜。

3) 将离心管置于磁力架上进行磁性分离，移出上清液到新的离心管中以备后续检测。从磁力架上取下离心管进行后续

4. 洗涤步骤。

4.1 磁珠洗涤

1) 加入1-2倍磁珠体积的结合/洗涤液到装有磁珠的离心管中，旋转混合2 min，磁性分离，移出清洗液到新的离心管中，以备取样检测；

2) 重复上述步骤，3-5次。

4.2 蛋白洗脱

1). 加入适量的洗脱缓冲液于离心管中,然后将离心管置于旋转混合仪上，室温旋转混合30 min(如果需要可延长时间), 磁性分离，收集洗脱液到新的离心管中，即为纯化的目标蛋白样品

2) 分别吸取20-50μl GST 融合蛋白原液、分离液，洗涤液和洗脱液，通过SDS-PAGE电泳分析各样品，确认是否存在蛋白

3). 洗脱液可以通过4℃透析或者分子筛去除游离的谷胱甘肽.。

4.3 蛋白检测

1）SDS-PAGE检测纯化效果，将PAGE胶取下放入塑料器皿中，加入适量蛋白快速染色液覆盖PAGE胶, 然后至于摇床上摇动，染色时间0.5 h-2 h或过夜均可。

2）染色结束后，PAGE胶放置于水中保存并拍照。

5.   磁珠清洗及储存

将装有磁珠的离心管中加入1mL 洗脱缓冲液，用移液器反复吹打3-5次，使磁珠重复悬浮，然后置于磁力架，磁性分离，弃上清，重复该操作2次。向离心管中加入1mL去离子水，用移液器反复吹打3-5次，使磁珠重复悬浮，然后置于磁力架，磁性分离，弃上清，重复该操作2次。最后加入20%乙醇中，使总体积等于初始悬浮液体积，置于 2-8°C 保存。

储存条件

置于2-8℃中保存。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2）本产品仅作科研用途！