价格:488
货号Profusion™ DNA Polymerase 超高保真DNA聚合酶
产品详情
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产品信息
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产品名称 |
产品编号 |
规格 |
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Profusion™ DNA Polymerase 超高保真DNA聚合酶 |
HRF0085 |
100 U |
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HRF0086 |
500 U |
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HRF0087 |
1000 U |
产品描述
Profusion™ DNA Polymerase 是一款超高保真 DNA 聚合酶，其采用蛋白融合技术且具有通用引物退火功能。它是一款融合到持续合成能力增强域的火球菌属样校正 DNA 聚合酶，使 Profusion™ DNA 聚合酶产生具有高准确度、灵敏度和抑制剂耐受性的 PCR 序列。 该酶具有 5’→3’DNA 聚合酶活性和 3’→5’核酸外切酶活性，其保真性是 Taq DNA 聚合酶的 100倍。 酶溶液中添加了延伸因子使得该酶具有长片段扩增能力，扩增速度达到 15-30sec/kb ，扩增目的片段的长度可长达 20 kb。本产品配备了优化缓冲液，添加了 PCR 增强组分，使得该酶适用于复杂模板的扩增。扩增产物为平末端。
产品组分
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组分名称 |
规格 |
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HRF0085 |
HRF0086 |
HRF0087 |
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（100 U） |
（500 U） |
（1000 U） |
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Profusion™ DNA Polymerase (2 U/μL） |
50 μL |
250 μL |
250 μL×2 |
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2×Profusion™ PCR buffer （含 Mg2+ ） |
1 mL×3 |
1 mL×15 |
1 mL×30 |
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10mM dNTP |
100 μL |
500 μL |
1000 μL |
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6×DNA loading buffer |
1 mL |
1 mL×5 |
1 mL×10 |
产品应用
1.高保真 PCR
2.基因克隆
3.生成测序模板
4.高 GC 含量 PCR
5.长片段 PCR（长达 20 kb）
6.突变
7.高通量 PCR
活性定义
用活性化的大马哈鱼精子 DNA 为模板/引物， 74℃ ，30 min 内，摄入 10 nmol 的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为 1 U。
运输和保存方法
冰袋运输。-20℃保存，有效期1年。
推荐PCR反应体系（冰盒上配制）
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组分 |
体积（μL） |
终浓度 |
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ddH2O |
to 50 μL |
- |
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2×Profusion™ PCR buffer （含 Mg2+ ） |
25 μL |
1× |
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10mM dNTP |
1uL |
0.2mM |
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DNA 模板 |
适量 |
- |
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Primer 正向 (10 μM) |
2.5 μL |
0.5 μM |
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Primer 反向 (10 μM) |
2.5 μL |
0.5 μM |
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Profusion™ DNA Polymerase (2 U/μL) |
0.5 μL |
1 U/50 μL |
【注】
1）试剂使用：使用前请充分融解和混匀。
2）聚合酶浓度：推荐使用 1 U/50 μL，可以在 0.5-2 U/50 μL 之间进行优化，不要超过2 U/50 μL。
3）聚合酶添加：高保真酶有 3’→5’外切酶活性，可能会降解引物，配制反应体系时，酶应该在最后添加。
4）Mg2+终浓度： 体系终浓度为 1.5 mM。如有特殊需要，可用 50 mM MgCl2，以 0.2-0.5 mM 为间隔向上摸索。
5）高 GC 模板： 高GC含量的片段扩增时，体系中加入终浓度为 3%的 DMSO 有利于扩增，可明显的提高扩增的效率。
不同模板的推荐使用量（50 μL 反应体系）：
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模板种类 |
扩增片段1kb-10kb |
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基因组 DNA |
50 ng-250 ng |
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质粒或病毒 DNA |
1pg-10 ng |
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cDNA |
1-5 μL (不超过 PCR 反应总体积的10%) |
PCR扩增程序：有以下三种程序可选择，优先选择两步法程序。
两步法（优先推荐）
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循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
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预变性 |
98℃ |
30s |
1 |
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变性 |
98℃ |
5-10 sec |
25-35 |
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延伸 |
72℃ |
15-30 sec/kb |
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终延伸 |
72℃ |
5-10 min |
1 |
三步法 （常规程序）
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循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
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预变性 |
98℃ |
30 sec |
1 |
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变性 |
98℃ |
5-10 sec |
25-35 |
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退火 |
65℃ |
10-30 sec |
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延伸 |
72℃ |
15-30 sec/kb |
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终延伸 |
72℃ |
10 min |
1 |
【注】
1）预变性温度和时间： 推荐温度： 98℃ ，时间： 30S ，复杂和高 GC 含量模板 3 min。
2）退火温度和时间： 推荐温度： 72℃，也可根据需要， 设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。
3）延伸温度和时间： 推荐温度： 72℃ 。时间： 30 sec/kb ，复杂模板根据实际情况可延长至 60 sec/kb。
4）扩增产物： 请将 PCR 扩增产物放置于-20℃保存，防止该酶降解扩增产物。扩增产物为平末端。
注意事项
1、本产品仅作科研用途！