新型植物基因组DNA快速提取试剂盒

新型植物基因组DNA快速提取试剂盒

价格:680

货号

产品详情

产品详情

 

产品信息

 

产品名称

产品编号

规格

 

新型植物基因组DNA快速提取试剂盒

HRN0541

50次

HRN0542

100次

HRN0543

200次

 

产品描述

 

      该试剂盒采用DNA吸附柱和新型独特的溶液系统,适合于从含酚类、多糖类和酶抑制物的植物样品中快速简单地提取基因组DNA。可在30分钟内完成一个或多个100mg新鲜或20mg干燥的植物样品DNA的纯化工作。提取过程不需要用到有毒的酚氯仿等有机物抽提,也不需要用到耗时的异丙醇或乙醇沉淀,并能快速高效地去除多糖类、酚类和酶抑制物等杂质,纯化的DNA可直接用于PCR、酶切和杂交等实验。

      新鲜或干燥的植物组织(细胞)磨碎后经裂解液裂解;蛋白质、多糖、细胞残片被沉淀去除;然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜, 再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤, 进一步将多糖,多酚和细胞代谢物,蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。

 

产品特点

 

1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。

2.不需要使用有毒的苯酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。

3.快速,简捷,单个样品操作一般可在1小时内完成。

4.数种去多糖、多酚成份和多次柱漂洗确保高纯度,OD260/OD280典型的比值达1.7~1.9,可直接用于PCR,Southern-blot和各种酶切反应。

 

运输和保存方法

 

1)本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

2)裂解液AP1、AP3/E低温时可能出现析出和沉淀,可以在65℃水浴几分钟帮助重新溶解(AP3加入乙醇前可加热,加入乙醇后不可加热),恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。

3)避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。

 

注意事项

 

1.所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13,000 rpm的传统台式离心机。

2.开始实验前将需要的水浴先预热到65℃备用。

3.缓冲液AP3/E中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。

4.不同来源的植物组织材料中提取DNA的量会有差异,一般100mg新鲜组织典型产量可达3-25μg。

5.洗脱液EB不含有螯合剂EDTA,不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱,但应该确保pH大于7.5,pH过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应该保存在-20℃。DNA如果需要长期保存,可以用TE缓冲液洗脱 (10mM Tris-HCl,1mM EDTA,pH 8.0),但是EDTA可能影响下游酶切反应,使用时可以适当稀释。

6.本产品仅作科研用途!

使用方法

 

提示:

→第一次使用前请先在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇,充分混匀,加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!

→第一次使用前请先在缓冲液AP3/E中加入指定量无水乙醇!

1.取适量植物组织(新鲜组织100 mg 或干重组织20 mg)在研钵中加入液氮充分碾磨成细粉。

  研磨前,可准备一个1.5mL离心管,加入400μL缓冲液AP1 和4μL RNase A(10 mg/mL)室温备用。

2.转移细粉(新鲜组织100 mg 或干重组织20 mg)到前面准备的1.5mL离心管(已加入400μL缓冲液AP1 和4μL RNase A(10 mg/mL)),旋涡振荡,充分混匀帮助裂解。

3.65℃水浴10分钟,在水浴过程中颠倒离心管2-3次,混合样品。

4.加入130μL 缓冲液AP2,充分混匀,冰上放置5分钟,13,000 rpm 离心5-10 分钟,小心吸取上清到一个新的1.5mL离心管,注意不要吸到界面物质。

  此步骤可以沉淀去除蛋白、多糖等各种杂质。

5.计算上清量,加入1.5倍体积的AP3/E(请先检查是否已加入无水乙醇!),立即振荡混匀。

加入AP3/E可能会出现絮状沉淀,但不影响DNA提取。注意将AP3/E直接加入到上清并立即吹打混匀。

6.将上一步所得混合物(包括可能出现的沉淀)加入一个吸附柱AC中,(吸附柱放入收集管中)13,000 rpm离心30-60秒,倒掉收集管中的废液(先加650μL离心,弃废液,再加入剩余的溶液,再次离心)。

7.加入600μL漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇!),13,000 rpm 离心30秒,弃掉废液。

8.重复一遍操作7。

  注意:如果吸附柱膜还呈现较多绿色色素,可添加此步漂洗,向吸附柱AC中加入500μL无水乙醇,13,000 rpm离心30秒,弃废液。

9.将吸附柱AC放回空收集管中,13,000 rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

10.取出吸附柱AC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加50-100μL洗脱缓冲液EB, 室温放置3-5分钟,13,000 rpm 离心1分钟。将得到的溶液重新加入吸附柱中,室温放置2分钟,13,000 rpm离心1分钟。

洗脱体积越大,洗脱效率越高,如果预计和需要产量高,可增大洗脱体积,如果需要DNA浓度较高,可以适当减少洗脱体积, 但是最小体积不应少于50μL,体积过小降低DNA洗脱效率,减少DNA产量。

11.DNA可以存放在2-8℃,如果要长时间存放,可以放置在-20℃。

{{ data.nameCh }}
价格:
下单可获得 {{ integral }} 积分
运费:全国包邮 浏览量:{{ data.viewCount + 1 }}
货号:
{{ choseAttributeData && choseAttributeData.specsArtNo || ' ' }}
规格:
{{ item.productSpecs }}
数量:
说明书及质量管理:
{{ item.name }}{{item.num}}
欢迎对本产品留下宝贵意见,我们将认真听取您的呼声
  • {{ item.name }}