• 说明书丨HRD0351-Human DiI-Oxidized Low Density Lipoprotein (Human DiI-Ox-LDL) 人源红色荧光标记氧化型低密度脂蛋白.pdf

产品信息

产品描述

LDL是由极低密度脂蛋白（VLDL）转变而来，主要功能是把胆固醇运输到全身各处细胞，运输到肝脏合成胆酸，其可用于研究受体介导的内吞作用过程，尤其是在动脉粥样硬化等疾病中，其血浆来源的LDL可用于研究LDL在功能和代谢中的氧化作用。

氧化的LDL（Ox-LDL）是修饰LDL中的一类。修饰的LDL除包括氧化修饰的LDL外，还包括乙酰化LDL及丙二醛（MDA）、4-羟烯酸（4-HNE）直接结合的LDL，这些未经氧化修饰而仅经一般化学修饰的LDL称为衍化的LDL。不同于衍化的LDL，Ox-LDL 的生理学独特性表现在：1）在细胞生理功能影响上，Ox-LDL可诱发细胞毒性作用，影响花生四烯酸的代谢，抑制胆固醇酯化作用等，但衍化的LDL无上述效应；2）Ox-LDL消耗LDL内源性抗氧化物质，使LDL上的维生素E含量下降，而MDA-LDL无上述效应；3）氧化修饰涉及脂质过氧化反应，LDL中的PUFAs被氧化。MDA对LDL修饰，是直接和ApoB-100结合成希夫氏碱，脂质过氧化反应轻微；4）氧化LDL在氧化程度低时，ApoB降解；在氧化程度高时，ApoB又可发生再聚合。MDA对LDL的修饰，ApoB无降解、聚合反应发生；5）Ox-LDL 产生的荧光峰波长为430nm，而MDA -LDL的荧光峰波长为460nm。Ox-LDL不经LDL受体代谢，由清道夫受体识别、结合、内吞饮入细胞并丧失正常的胆固醇代谢途径，引起细胞内脂质沉积，泡沫样变。

LDL氧化修饰的方式有很多种，常见的有：1）细胞介导的LDL氧化修饰，又称为生物氧化修饰的LDL。如内皮细胞，巨噬细胞，单核细胞都具有此功能；2）过度金属离子介导的LDL氧化修饰，如Ca2+，Fe2+等；还有其他形式的氧化修饰，包括物理方法如紫外线，或过氧化物酶催化。

本品为红色荧光标记的氧化型人源低密度脂蛋白（Human DiI-Ox-LDL），是标记荧光探针DiI（1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'- tetramethyl-indocarbocyanine perchlorate）的Ox-LDL，可以标记血管内皮细胞和巨噬细胞，可用来鉴定并分选这些细胞，以及用来研究不同细胞系对修饰化LDL的内吞作用。我司提供的DiI-Ox-LDL，每个批次均经过牛大动脉内皮细胞和小鼠巨噬细胞的标记检测来评估产品的标记特异性，从而保证结果的一致性。

Human DiI-Ox-LDL为无菌包装，可以直接稀释使用。除提供DiI-Ox-LDL，我们还提供不带标记的Ox-LDL，Ac-LDL（乙酰化修饰）以及不经修饰的LDL等。

产品性质

运输与保存方法

冰袋运输。

4C无菌避光，收到货后可稳定保存6周。千万不可冻存！使用时一定要无菌操作！

注意事项

1) 本品的稀释工作液极不稳定，建议即配即用；

2) 长期贮存可能会有沉淀析出，属于正常现象，低速离心2 min去除沉淀即可使用；

3) LDL与LDL受体的结合需要Ca2+和Mn2+的参与，过量EDTA的存在会抑制其结合；

4) 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

5) 本产品仅作科研用途!

操作步骤

1) 无菌条件下，将Human DiI-Ox-LDL用细胞培养基稀释至20-40 g/ml。

2) 加入活细胞内，37℃培养3-6小时。

3) 孵育结束，吸去含有Human DiI-Ox-LDL的培养基，并用无探针的培养基洗几次。

4) 根据实验需求用荧光显微镜或流式细胞仪检测。

a）荧光显微镜观察

采用标准的罗丹明激发：发射滤光片（或建议使用波长为：Ex/Em=549nm/565nm）；若需要请使用含3%甲醛的PBS进行固定，切勿使用甲醇或丙酮固定，因Dil易溶于有机溶剂。注：需设阳性细胞以做对照。

b）细胞分选（流式细胞术）

胰蛋白酶处理细胞或者加入EDTA制成单细胞悬液，选用合适的已标记纯化细胞用作阴性和阳性对照，从而进行流式分选设门（gate）。（建议使用波长为Ex: 488/514/549nm; Em: 565nm）。