• Q、SP、DEAE和CM Herose琼脂糖凝胶介质产品说明书.pdf

产品信息

产品描述

离子交换树脂主要包括强酸性阳离子交换树脂、弱酸性阳离子交换树脂、强碱性阴离子交换树脂和弱碱性阴离子交换树脂4种，广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的分离纯化。

DEAE弱阴离子交换树脂以高度交联的6%琼脂糖为介质，可耐受较高的流速及更高的化学稳定性，适合实验室及工业大规模纯化，离子交换基团-O-CH2CH2-N(C2H5)2。

本品Hi DEAE弱阴离子纯化预装柱是一种以DEAE弱阴离子交换树脂为填料的中压预装柱，规格为1 mL，该预装柱具有标准接口，可以适配商品化的各类中压色谱系统，如KTA等，方便客户操作。

产品性质

运输和保存方法

冰袋运输。4℃保存，有效期2年。

使用方法

1 缓冲液的准备

所用水和Buffer在使用前最好用0.22 m或0.45 m滤膜过滤。

2 样品准备

样品在使用前最好用0.22 m或0.45 m滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。

3 样品纯化

1）将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子，将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口，将预装柱接到色谱系统中，并旋紧。

2）用3-5倍柱体积的去离子水冲洗出存储缓冲液。

3）使用至少5倍柱床体积的结合Buffer平衡色谱柱，推荐流速为1 mL/min。

4）利用泵或注射器上样。

注：样品的粘度增加使得即使上样体积很少也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。

5）用洗杂Buffer冲洗柱子，直到紫外吸收达到一个稳定的基线（一般至少10-15个柱体积）。

6）用洗脱Buffer采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中，通常5倍柱体积洗脱液就足够了。可以用一个小的梯度，例如20倍柱体积或更多，来分离不同结合强度的蛋白质。

4 SDS-PAGE检测

将得到的样品（包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分）以及原始样品使用SDS-PAGE检测纯化效果。

5 填料清洗

离子交换树脂每次使用后可以用1M NaCl甚至更高离子强度溶液或高pH溶液清洗，然后用至少5倍柱体积的Buffer进行平衡至离子强度或pH值稳定。

CIP（Cleaning In Place）清洗

离子交换树脂可以重复使用而无需再生，但随着非特异性结合的蛋白的增多和蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量都下降，这时可按照下面方法对树脂进行清洗。

1）去除一些沉淀或变性物质

用2倍柱体积的1 M NaOH溶液进行清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS, pH7.4清洗。

2）去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质

用3-4倍柱体积的70%乙醇或3-4倍柱体积的1% Triton X-100清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS, pH7.4清洗。

3）去除一些离子键结合物质

用3-4倍柱体积的2 M NaCl清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS, pH 7.4清洗。

注意事项

1）请勿冷冻保存本产品。

2）Resin使用前一定要充分颠倒若干次，使琼脂糖珠混合均匀。

3）所有操作过程中，样本需要在4℃或冰上操作。

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

5) 本产品仅作科研用途!

附表 问题及解决方案