价格:1,099
货号Protein A IP kit
产品详情
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产品信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格/元 |
| Protein A IP/Co-IP Kit |
HRD2041 |
40T/Kit | ¥1099 |
产品描述
Protein A IP kit包含足够完成40个反应的试剂，每个反应使用25 µL磁珠。能够高效完成抗原免疫沉淀（IP）及免疫共沉淀（Co-IP）实验，抗体用量小于10μg且无需离心。
试剂盒中提供 Protein A Magnetic Beads可以实现快速便捷的抗原磁性分离。免疫沉淀磁珠试剂盒配有经过优化预制的缓冲液，为免疫沉淀实验提供了最佳的反应条件，增强了免疫沉淀实验的稳定性。本产品可广泛应用于细胞裂解物、细胞分泌上清、血清、腹水等样品中抗原的免疫沉淀反应。
试剂盒组成:
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Protein A Magnetic Beads |
1 mL |
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IP Lysis/Wash Buffer |
100 mL |
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SDS-PAGE Sample Loading Buffer（5×） |
10 mL |
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Phosphatase inhibitor cocktail（50×） |
2 mL |
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PMSF（100×） |
1 mL |
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Elution Buffer |
5 mL |
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Neutralization Buffer |
1 mL |
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磁力架 |
双排16孔 |
使用说明
贴壁细胞样品：
1.移去培养基，用 PBS 洗细胞两次。
2.收集细胞至1.5 mL EP 管内，按比例加入IP Lysis/Wash Buffer，同时加入PMSF等相应的抑制剂，混匀后置于冰上静置5-20 min（期间混匀几次）。
3.4 ℃,12000-16000 g,10 min离心收集上清液，置于冰上以备后续实验（或置于-80℃长期保存）。
培养皿IP Lysis/Wash Buffer推荐使用体积：
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培养皿大小/表面积 |
IP Lysis/Wash Buffer体积 |
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100 mm × 100 mm |
500-1000 µL |
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100 mm × 60 mm |
100-300 µL |
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6孔板 |
100-200 µL |
悬浮细胞样品：
1.4℃、500-1000×g、10 min，收集细胞，弃上清。
2.用PBS 洗细胞一次，即用 PBS 将细胞团重悬，4℃、500-1000×g、10 min，收集细胞，弃上清。
3.用预冷的IP Lysis/WashBuffer重悬细胞。每 1mg 细胞使用5-10 μL IPLysis/Wash Buffer。同时加入PMSF等相应的抑制剂，混匀后置于冰上静置5-20 min（期间混匀几次）。
4.4 ℃,12000 -16000×g,10 min离心收集上清液，置于冰上以备后续实验（或置于-80℃长期保存）。
血清样品：
一般建议建议用IP Lysis/Wash Buffer稀释血清样品至目标蛋白终浓度为50~150µg/mL，置于冰上备用（或置于-20 ℃长期保存）。
免疫复合物的制备
注意：样品所需的量和孵育时间均依赖于每个特定的抗体-抗原体系，因而可能需要优化才能得到最大产量。
以下实验方案针对2-10μg亲和纯化的抗体，根据需要可以按比例放大。
1. 在离心管中，将每个样品的细胞裂解液与2-10μg免疫沉淀抗体结合。每个免疫沉淀反应推荐的总蛋白量为500-1500μg。
2.用IP Lysis/Wash Buffer将抗体以及制备好的样品稀释至300-500μL。
3.在室温下孵育1-2 h，或4 ℃过夜，以形成免疫复合物。
免疫沉淀：
注意：为保证磁珠均匀分布，使用前通过反复颠倒或轻微涡旋混匀瓶中磁珠。
1. 将25 µL (0.25 mg)的Protein A Magnetic Beads加入1.5 mL离心管中。
2. 向磁珠中加入500 µL预冷PBS，轻柔混匀。
3. 将离心管放入磁力架中收集磁珠到离心管的一边。去除上清。
4. 向离心管中加入200-500 µL IPLysis/Wash Buffer。颠倒离心管数次或轻微涡旋混匀1min。用磁力架收集磁珠。去除上清。
5. 将抗原样品/抗体混合物加入装有磁珠的离心管中，保持混匀室温下孵育1-2 h。
6. 用磁力架收集磁珠，除去未结合的样品，保存以备分析。
7. 向离心管中加入500 µL IPLysis/Wash Buffer，轻柔混匀。收集磁珠，弃上清。再重复洗两次。
8. 低pH洗脱：向离心管中加入100 µL Elution Buffer。保持混匀在室温下孵育离心管5-10 min。通过磁力分离磁珠，保留含有目的抗原的上清。每100 µL 洗出液中加入10 µL NeutralizationBuffer来中和低pH。
9. 变性洗脱：向离心管中加入80-100 µL SDS-PAGE Sample Loading Buffer（1×），将样品置于100℃水浴或者金属浴中加热10 min。通过磁力架分离磁珠，保留含有目的抗原的上清。
储存条件
冰袋运输；
Protein A MagneticBeads、IP Lysis/Wash Buffer、ElutionBuffer、Neutralization Buffer于4 ℃保存；
PMSF、Phosphataseinhibitor cocktail、SDS-PAGE SampleLoading Buffer 于 -20 ℃保存。
产品优势
1.具有高效的蛋白结合能力。
2.超低非特异性吸附的性能。
3.配合磁力架操作省时、简便、温和。
4.产品稳定性高。
注意事项
1.进行实验操作之前，请务必认真阅读本操作说明书。
2.请勿高速离心、干燥或冷冻磁珠，这些操作会导致磁珠聚集而降低结合能力。
3. IP实验中不同类型的抗体与抗原结合的亲和性是有区别的，抗体与抗原结合还会受到IP Lysis/Wash Buffer的影响，因此，如使用本试剂盒不能获得最佳的实验结果，可自行优化操作细节或者筛选及配制缓冲液进行实验。
4.微球使用前应充分振荡均匀。微球应保存在储存溶液中，防止干燥。
5.本产品仅供研究使用。