脱氢酶(dehydrogenase, DHA)试剂盒

脱氢酶(dehydrogenase, DHA)试剂盒

价格:600

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产品信息

 

产品名称

测定方法

产品编号

规格

脱氢酶(DHA)试剂盒

分光光度法

HRK2831

50管/48样

正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

 

测定意义

 

脱氢酶(dehydrogenase, DHA) 是一类催化物质氧化还原反应的酶,催化底物通过细胞色素系统被氧化,释放的能量供机体使用,是生物体取得能量的一种方式。

 

测定原理

 

在细胞呼吸过程中,氢受体2, 3, 5 - 氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride, TTC)在脱氢酶作用下接受氢以后,被还原为三苯基甲鐟(Triphenyl Formazone, TF),TF呈现红色,在波长485nm处有最大吸收峰,采用分光光度法于485nm测定其吸光值,即得脱氢酶活性。

 

自备实验仪器及用品

 

筛子、天平、恒温培养箱或水浴锅、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、冰、蒸馏水、甲醇(不允许快递,请用户自备)。

 

试剂的组成和配制

 

提取液:液体50mL×1瓶,4℃保存

试剂一:粉剂×1瓶,使用前加10mL试剂二溶解,4℃避光保存(尽量现配现用)。

试剂二:液体20mL×1瓶,4℃保存。

试剂三:甲醇,自备

 

样品处理

 

1.细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。

2.组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后8000g,4℃,离心20min。

3.液体:直接检测。

 

测定步骤和操作表

 

 

空白管

测定管

样品(μL)

 

150

蒸馏水(μL)

150

 

试剂一(μL)

 

150

试剂二(μL)

150

 

充分混匀,37℃培养24h

试剂三(μL)

1350

1350

振荡1h,8000g,25℃,离心5min,取1mL上清于比色皿,测定A485,△A=A测定-A空白管。空白管只要做一管。

 

脱氢酶活力计算

 

标准曲线:y = 0.0422x - 0.0312;R2 = 0.9988;x为标准品浓度(μg/mL),y为吸光值。

1.按照蛋白浓度计算

酶活单位定义:在37℃时,每mg蛋白样品每min催化产生1μgTF为一个酶活性单位。

DHA(μg/ min / mg prot)=(△A+0.0312)÷ 0.0422×V反总÷(Cpr×V样)÷T= 0.181×(△A+0.0312)÷Cpr

2.按照样本质量计算

酶活单位定义:在37℃时,每克样品每min催化产生1μgTF为一个酶活性单位。

DHA(μg/ min /g 鲜重)=(△A+0.0312)÷ 0.0422×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T= 0.181×(△A+0.0312)÷W

3.按液体体积计算

酶活单位定义:在37℃时,每mL样本每min催化产生1μgTF为一个酶活性单位。

DHA(μg/ min /mL)=(△A+0.0312)÷ 0.0422×V反总÷V样÷T= 0.181×(△A+0.0312)

V反总:反应总体积,1.65mL;V样:加入反应体系中样本体积,0.15mL;T:培养时间,1d=1440min;W:样品质量,g; Cpr:蛋白浓度,mg/mL。

 

注意事项

 

1.配制好的试剂一避光保存于4℃,最好在一周内使用,若出现红色,则不能使用。

2.本产品仅作科研用途!

 

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