• 说明书丨Ik-2004-GST Pull-down 试剂盒.pdf

产品信息:

产品描述：

    GST Pull-down试剂盒产品能高效捕获和纯化与GST 标签融合蛋白相互作用的蛋白，无需离心。试剂盒中提供 GST 标签蛋白琼脂糖磁珠和磁力架以实现快速便捷的蛋白磁性分离，以及优化配套的缓冲液。

      与基于琼脂糖材料相比，GST 标签蛋白琼脂糖磁珠 进行了优化，能够更高效，更特异性与 GST 标签融合蛋 白进行结合，具有较低的蛋白非特异吸附率，洗脱条件更 均一，可大幅度缩短实验操作 所需的时间。

本产品主要应用于体外表达纯化蛋白后，研究蛋白之间相互作用等相关研究。

产品组成：

注意事项：

1. 进行实验操作之前，请务必认真阅读本操作说明书。
2. 磁珠使用前应充分振荡均匀。
3. 磁珠应保存在储存溶液中，防止干燥。
4. 请勿将磁珠冷冻或离心，以免引起不可逆聚集。
5. 本产品仅供研究使用。

操作步骤：

1.磁珠准备

将 GST 标签蛋白琼脂糖磁珠混匀，取 50μL 的磁珠悬浮液，转移至离心管中，放置在磁力架上，磁性分离后弃上清。然后添加 500μL Pull-down buffer， 混匀后，然后置于磁力架上，磁性分离后弃上清（磁珠加 入量根据实验要求酌情而定）。

2.样品准备

取 1.5mL 离心管，加入适量的 GST 标签融合蛋白、待测相互作用蛋白、与上述预处理好 GST 标签蛋白琼脂糖磁珠进行混合，同时按比例加入 PMSF，并补充 Pull-down buffer 至总体积 500μL。

注意：请确保 GST 标签融合蛋白和待测相互作用蛋白样品已经过纯化。

3.蛋白结合

将上述混合物，置于翻转混匀仪孵育，4℃、2∽8h 或过夜，然后置于磁力架上，磁性分离后弃上清。

4．洗杂

向离心管中加入 500μL Washing Buffer，置于翻转混匀仪孵育 5∽10min，然后置于磁力架上，磁性分离后弃上清。重复 3∽5 次。

(根据结合强度和背景情况增加或减少洗涤次数)

5．蛋白检测

在上述离心管中加入 50∽100μL SDS-PAGE Sample Loading Buffer（1×），将样品置于 100℃水浴或者金属浴中加热 10min。通过磁力架分离磁珠，保留含有目的抗原的上清。之后可通过 Western blot 进行检测或样品保存于-80℃。

可选步骤：

SDS-PAGE 检测：将跑好的 PAGE 胶取下放入塑料器皿中，加入适量蛋白快速染色液覆盖 PAGE 胶, 然后置于摇床上摇动，染色时间 0.5h∽2h 或过夜均可。染色结束后，PAGE 胶放置于水中保存并拍照。