• 说明书丨HRR0521-血液组织细胞基因组DNA提取试剂盒.pdf

产品信息:

产品简介：

      本试剂盒采用了特殊的离心吸附柱和缓冲液体系，可以从全血（≤1mL）、培养细胞和动物组织中快速提取基因组DNA。只要30min左右即可完成提取，操作简单，使用方便。提取出的基因组DNA不含有蛋白和其他杂质，纯度极高。

     本基因组DNA提取试剂盒通用性较强，应用范围较广，目前验证的部分菌有：哺乳动物全血、禽类全血、两栖类全血、培养细胞、动物组织、小鼠尾部和大鼠尾部等部位。

     本试剂盒可提取3-40μg纯净的基因组 DNA，所得基因组 DNA 可直接用作 PCR 模板、酶切、杂交等分子生物学实验。

储存事项：

1）本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。

2）试剂盒储存于低温（4℃或者－20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃－25℃）进行。

3）避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

产品特点：

1.不使用有毒的苯酚，氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。

2.简捷，单个样品操作一般可在30分钟内完成。

3.适应性比较广泛，可以提取包括乳动物全血、禽类全血、两栖类全血、培养细胞、动物组织、小鼠尾部和大鼠尾部等部位DNA。

4.多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280 典型的比值高达 1.7～1.9，长度可达30kb-50kb，

可直接用于PCR，Southern-blot 和各种酶切反应。

产品组分：

使用前必读：

1、实验过程使用的离心机均可在室温进行（4℃也可以），转速可以达到12,000rpm的传统台式离心机。

2、需要自备异丙醇。

3、开始实验前根据需要将水浴预热到 37℃或者 70℃备用。

4、Buffer BB和Buffer IR中含有刺激性化合物，操作时务必戴手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

5、洗脱液Elution buffer不含有螯合剂 EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱，但应该确保pH大于7.5，pH过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应该保存在-20℃。DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），但是

EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。

使用方法：

提示：

→第一次使用前请先在 Buffer IR，Buffer WB中添加指定量的无水乙醇，并做好标记！

一、全血样品

1、取200μL新鲜、冷冻或加入各种抗凝剂的血液，放入1.5mL离心管。

如果全血起始量小于200μL，则用生理盐水补足到200μL。如果起始量介于200μL-300μL之间，则后续操作需要按照比例增加试剂用量。如果起始量介于300μL-1mL之间，则需要先进行红细胞裂解操作。

如果处理血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液，其红细胞为有核细胞，因此处理量5-20μL，可加1×PBS补足到200μL后进行后续步骤。

2、加入20μL蛋白酶K（20mg/mL）溶液，充分混匀，再加入200μL Buffer BB，立刻涡旋振荡充分混匀，在70℃放置10分钟。溶液应变清亮（但颜色偏黑色）。

可选步骤，一般不需要:如果RNA残留较多，需要去除RNA，可以在加入200μL Buffer BB前加20μL RNaseA（25mg/mL）溶液，振荡混匀，室温放置5-10分钟。

3、冷却后加100μL异丙醇，立刻涡旋振荡充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀。

上述步骤中立刻涡旋或者吹打充分混匀非常重要，混匀不充分严重降低产量，必要时如样品粘稠不易混匀时可以涡旋振荡15秒混匀。

4、将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱中，（吸附柱放入收集管中）12,000rpm 离心60秒，倒掉收集管中的废液。

5、加入500μL抑制物去除液Buffer IR，12,000rpm离心30秒，弃废液。

6、加入500μL漂洗液Buffer WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000rpm离心30秒，弃掉废液。

7、加入500μL漂洗液Buffer WB，12,000rpm离心30秒，弃掉废液。

8、将吸附柱放回空收集管中，12,000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

9、取出吸附柱，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加100μL洗

脱缓冲液Elution buffer（洗脱缓冲液事先在65-70℃水浴中预热），室温放置3-5分钟，12,000rpm离心1分钟。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置2分钟，12,000rpm离心1分钟。

洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是最小体积不应少于50μL，体积过小降低DNA洗脱效率，减少DNA产量。

10.DNA可以存放在2-8℃,如果要长时间存放，可以放置在-20℃。

二、组织培养细胞

1、收集约10⁵-10⁶悬浮细胞到一个1.5mL离心管；对于贴壁细胞，应该先用胰蛋白酶消化后吹打下来收集。

2、12,000rpm离心10秒，使细胞沉淀下来。弃上清，留下细胞团和大约10-20μL残留的液体。

3、加200μL1×PBS重悬洗涤细胞，12,000rpm离心10秒，使细胞沉淀下来。完全吸弃上清,将细胞沉淀重悬于180μL 1×PBS中。

4、加入20μL蛋白酶K（20mg/mL）溶液，充分混匀，再加入200μL Buffer BB，立刻涡旋振荡充分混匀，在70℃放置10分钟。

     可选做步骤:如果RNA残留较多，需要去除RNA，可以在加入200μL Buffer BB前加20μL RNaseA（25mg/mL）溶液，振荡混匀，室温放置5-10分钟。

5、冷却后加100μL异丙醇，立刻涡旋振荡充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀。

6、将上一步混合物（包括可能有的沉淀）加入一个吸附柱中，（吸附柱放入收集管中）12,000rpm离心60秒，倒掉收集管中的废液。

7、加入500μL抑制物去除液Buffer IR，12,000rpm离心30秒，弃废液。

8、加入500μL漂洗液Buffer WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000rpm离心30秒，弃掉废液。

9、加入500μL漂洗液Buffer WB，12,000rpm离心30秒，弃掉废液。

10、将吸附柱放回空收集管中，12,000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

11、取出吸附柱，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加100μL洗脱缓冲液Elution buffer（洗脱缓冲液事先在65-70℃水浴中预热），室温放置3-5分钟，12,000rpm离心1分钟。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置2分钟，12,000rpm离心1分钟。

洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是最小体积不应少于50μL，体积过小降低DNA洗脱效率，减少DNA产量。

• DNA可以存放在2-8℃,如果要长时间存放，可以放置在-20℃。

三、动物组织（如鼠肝脑）

1、将20-50mg新鲜或者解冻的组织用解剖刀切成小碎块（切成小块可以提高产量）或者在液氮中研磨组织成细粉后，转入装有180μL组织裂解液Buffer TLB的1.5mL离心管中，用大口径枪头吹打混匀。

2、加入20μL的蛋白酶K溶液（20mg/mL），立刻涡旋振荡充分混匀。

3、将裂解物放置在55℃水浴1-3小时或者直到组织消化完全，期间轻柔的振荡几次帮助裂解。

可选做步骤:如果RNA残留较多，需要去除RNA，可在完成步骤c后加20μLRNase A（25mg/mL）溶液，振荡混匀，室温放置5-10分钟。

4、加入200μL结合液Buffer BB，立刻涡旋振荡充分混匀，70℃放置10分钟。

5、冷却后加100μL异丙醇，立刻涡旋振荡充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀。

6、用1mL的枪头吸取混合物，将混合物加入一个吸附柱中，（吸附柱放入收集管中）12,000rpm离心60秒，倒掉收集管中的废液。

     如果有不溶组织物可能堵住枪头，可将枪头在吸水纸上轻蹭去除不溶物；如果吸上来的混合物少则可以将枪头和不溶物一起弃去，该做法是为了去除不溶物，以免堵塞离心柱。

7、加入500μL抑制物去除液Buffer IR，12,000rpm离心30秒，弃废液。

8、加入500μL漂洗液Buffer WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000rpm离心30秒，弃掉废液。

9、加入500μL漂洗液Buffer WB，12,000rpm离心30秒，弃掉废液。

10、将吸附柱放回空收集管中，12,000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

11、取出吸附柱，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加100μL洗脱缓冲液Elution buffer（洗脱缓冲液事先在65-70℃水浴中预热），室温放置3-5分钟，12,000rpm离心1分钟。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置2分钟，12,000rpm离心1分钟。

洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是最小体积不应少于50μL，体积过小降低DNA洗脱效率，减少DNA产量。

• DNA可以存放在2-8℃,如果要长时间存放，可以放置在-20℃。

四、动物组织（鼠尾）

1、将0.2-0.5cm的鼠尾巴尖（即20-50mg）剪碎（一定要剪0-2cm范围内的尾巴尖，否则裂解效果不好），或者在液氮中研磨组织成细粉后，转入装有180μL组织裂解液Buffer TLB的1.5mL离心管中，用大口径枪头吹打混匀。

2、加入20μL的蛋白酶K（20mg/mL），立刻涡旋振荡充分混匀。

3、将裂解物放置在55℃水浴3小时或者直到组织消化完全，期间轻柔的振荡几次帮助裂解。

     可选做步骤:如果RNA残留较多，需要去除RNA，可在完成步骤c后加20μLRNase A（25mg/mL）溶液，振荡混匀，室温放置5-10分钟。

4、用一个1mL不带针头的一次性输液器抽打裂解物2-3次。

5、加入200μL结合液Buffer BB和100μL异丙醇，立刻涡旋振荡充分混匀。

6、12,000rpm离心5分钟，将上清加入一个吸附柱中，（吸附柱放入收集管中）12,000rpm 离心30-60秒，倒掉收集管中的废液。

7、加入500μL抑制物去除液Buffer IR，12,000rpm离心30秒，弃废液。

8、加入500μL漂洗液Buffer WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000rpm离心30秒，弃掉废液。

9、加入500μL漂洗液Buffer WB，12,000rpm离心30秒，弃掉废液。

10、将吸附柱放回空收集管中，12,000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

11、取出吸附柱，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加100μL洗脱缓冲液Elution buffer（洗脱缓冲液事先在65-70℃水浴中预热），室温放置3-5分钟，12,000rpm离心1分钟。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置2分钟，12,000rpm离心1分钟。

洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是最小体积不应少于50μL，体积过小降低DNA洗脱效率，减少DNA产量。

12、DNA可以存放在2-8℃,如果要长时间存放，可以放置在-20℃。

产品仅用于科研等非医疗用途！