产品信息

产品描述

    Protein G琼脂糖凝胶通常用于从血清、细胞培养上清液中分离抗体或腹水，用于免疫沉淀和细胞或组织抗原的共免疫沉淀。Protein G琼脂糖凝胶含有重组蛋白，结合两种蛋白质的IgG结合域的Protein G，还包含五个来自蛋白质的Fc结合域，这些结构域可以与来自多种来源的抗体结合不同种类，包括老鼠、人、兔、猪、狗还有猫。

储存条件

在4°C下储存2年。

使用说明

1.培养培养细胞（80-90%汇合单层在100 mm细胞培养板中或大约2-5 × 10⁷烧瓶中的悬浮细胞）。

2.将3mL冰冷裂解/洗涤缓冲液添加到细胞单层并在4°C下培养10分钟。对于悬浮细胞，加入裂解/洗涤液缓冲液至15 mL锥形容器中的洗涤细胞颗粒离心管。

3.通过反复吸入细胞，破坏细胞21号表针并转移至15mL锥形管离心管。

4.用额外的1.0mL冰镇水清洗细胞培养板裂解/洗涤缓冲液并与原始。

5.通过在10000 x g下离心分离颗粒细胞碎片在4°C下10分钟。将上清液转移到新鲜的15°C溶液中mL冰上锥形离心管。预澄清液（可选步骤）通过添加1.0µg适当的对照IgG（正常小鼠、大鼠、兔或山羊IgG，对应于原生动物的寄主种类抗体），以及20-50µL的再悬浮蛋白质G琼脂糖的体积。在4℃下培养0.5小时

6.在2500转/分的转速下通过离心分离颗粒珠（约1000 x g）在4°C下持续5分钟。将上清液（细胞裂解液）转移到新鲜的15mL溶液中冰上锥形离心管。

7.转移1mL上述细胞裂解物，或约100-500µg总细胞蛋白，至1.5mL微量离心管。添加1-10微升（即0.2-2微克）一级抗体（最佳抗体浓度）应通过滴定法测定）并培养1小时在4°C下工作1小时。

8.添加20µL再悬浮体积的蛋白质G琼脂糖。盖上试管并在摇杆上4°C下孵化平台或旋转装置1小时至一夜。

9.在2500℃下离心收集免疫沉淀转速（约1000 x g），在4°C下持续5分钟。小心地抽吸并丢弃上清液。

10.用1.0 mL Biolinkedin®IP清洗小球4次溶解/洗涤缓冲液（更严格）或PBS（更少严格），每次重复离心步骤在上面

11.最终清洗后，抽吸并丢弃上清液和再次使用40µL的1x电泳样品制备粒剂缓冲器

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2）本产品仅作科研用途！