• 说明书丨HRN0663-新型植物基因组DNA大量提取试剂盒.pdf

产品信息

产品描述

      该试剂盒采用DNA吸附柱和新型独特的溶液系统，适合于从含酚类、多糖类和酶抑制物的植物样品中快速简单地提取基因组DNA。可在1小时左右完成一个或多个1g新鲜或200mg干燥的植物样品 DNA 的纯化工作。提取过程不需要用到有毒的酚氯仿等有机物抽提，也不需要用到耗时的异丙醇或乙醇沉淀，并能快速高效地去除多糖类、酚类和酶抑制物等杂质，纯化的DNA可直接用于PCR、酶切和杂交等实验。

      新鲜或干燥的植物组织（细胞）磨碎后经裂解液裂解;蛋白质、多糖、细胞残片被沉淀去除;然后基因组 DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗一离心的步骤,进一步将多糖，多酚和细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。

产品组分

本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。

产品特点

1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。

2.不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。

3.快速，简捷，单个样品裂解后操作一般可在1h内完成。

4.数种去多糖、多酚成分和多次柱漂洗确保高纯度，OD₂₆₀/OD₂₈₀典型的比值达1.7～1.9，可直接用于PCR，Southern-blot和各种酶切反应。

运输和保存方法

1）缓冲液AP1、AP3/E低温时可能出现析出和沉淀，可以在65℃水浴几分钟帮助重新溶解（AP3/E加入乙醇前可加热，加入乙醇后不可加热），恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。

2）避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

注意事项

1.开始实验前将需要的水浴先预热到65℃备用。

2.缓冲液AP3/E中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

3.不同来源的植物组织材料中提取DNA的量会有差异，一般1g新鲜组织典型产量可达30-260μg。

4.洗脱液EB不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱，但应该确保批pH大于7.5， pH过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应该保存在－20℃。DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl， 1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。

5.本产品仅作科研用途！

使用方法

提示：

→第一次使用前请先在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!

→第一次使用前请先在缓冲液AP3/E中加入指定量无水乙醇。

→将缓冲液AP1在65℃水浴预热。

1.取适量植物组织（最大处理量不超过新鲜组织1g或干重组织200 mg〉在研钵中加入液氨充分碾磨成细粉。

2.转移细粉到一个15mL离心管，不要解冻，加入5 mL缓冲液AP1（已经65℃预热）和40 μL RNaseA(10 mg/mL)，旋涡振荡，充分混匀帮助裂解。

如果组织裂解困难，可根据需要加一个轻柔匀浆10秒的步骤帮助裂解。大多数情况下不需要离心去除未完全裂解的组织，因为后面有一个离心去除的步骤。

可选:多糖含量特别高的时候可以在AP1加入2%PVP40,000；多酚含量特别高的时候可以在AP1中加入0.2% beta疏基乙醇。也可两者同时加入。

3.65℃水浴10-15分钟，在水浴过程中颠倒离心管2-3次，混合样品。

4.加入1.8 mL缓冲液AP2，充分混匀，冰上放置10分钟，9,000×g离心10分钟，小心吸取上清到一个新的50mL离心管，注意不要吸到界面物质。

如果没有高速离心机，也可以4,000-5,000×g 离心，适当延长时间即可。

5.计算上清量，加入1.5倍体积的AP3/E(请先检查是否已加入无水乙醇!)，立即吹打混匀。

加入AP3/E可能会出现絮状沉淀，但不影响DNA提取。注意将AP3/E直接加入到上清并立即吹打混匀。

6.将上一步所得混合物(包括可能出现的沉淀)加入一个吸附柱AC中，(吸附柱放入收集管中）3,000 -5,000×g离心5分钟，倒掉收集管中的废液。

7.加入10mL漂洗液WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），3,000 -5,000×g离心4分钟，弃掉废液。

8.加入10mL漂洗液WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），3,000 -5,000×g离心3分钟，弃掉废液。

9.将吸附柱AC放回空收集管中，最高速（最好大于9,000×g，如果离心机转速低，需要相应延长离心时间）离心10分钟以干燥膜基质残留乙醇，用枪头吸除内圈压环和柱壁之间可能残留的乙醇，室温或者烘箱晾干几分钟。

10.取出吸附柱AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加1-2mL洗脱缓冲液EB（已经65-70℃预热）， 室温放置5分钟，3,000 -5,000×g离心3分钟，得到DNA。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置2分钟后再洗脱一遍，可以提高浓度和产量。。

洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是最小体积不应少于500μL，体积过小降低DNA洗脱效率，减少DNA产量。

11.DNA可以存放在2-8℃，如果要长时间存放，可以放置在－20℃。