Co-IP试剂盒

价格:699

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产品详情

产品信息

产品名称	产品编号	规格
Basic IP/Co-IP Kit	IK-1018	40T/Kit

产品描述

基础免疫沉淀/免疫共沉淀试剂盒，包含足够完成 40 个反应的试剂，能够高效完成抗原免疫沉淀（IP）及免疫共沉淀（Co-IP）实验。

试剂盒中配有经过优化预制的缓冲液，为免疫沉淀实验提供了最佳的反应条件，增强了免疫沉淀实验的稳定性。本产品可广泛应用于细胞裂解物、细胞分泌上清、血清、腹水等样品中抗原的免疫沉淀反应。

试剂盒组成:

IP Lysis/Wash Buffer	100 mL
SDS-PAGE Sample Loading Buffer（5×）	10 mL
Phosphatase inhibitor cocktail（50×）	2 mL
PMSF（100×）	1 mL
Elution Buffer	5 mL
Neutralization Buffer	1 mL

使用说明

贴壁细胞样品：

1. 移去培养基，用 PBS 洗细胞两次。

2. 收集细胞至1.5 mL EP 管内，按比例加入IP Lysis/Wash Buffer，同时加入PMSF等相应的抑制剂，混匀后置于冰上静置5-20 min（期间混匀几次）。

3. 4 ℃,12000-16000 g,10 min离心收集上清液，置于冰上以备后续实验（或置于-80℃长期保存）。

培养皿IP Lysis/Wash Buffer推荐使用体积：

培养皿大小/表面积	IP Lysis/Wash Buffer体积
100 mm x 100 mm	500-1000 µL
100 mm x 60 mm	100-300 µL
6孔板	100-200 µL

悬浮细胞样品：

1. 4℃、500-1000 g、10 min，收集细胞，弃上清。

2. 用PBS 洗细胞一次，即用 PBS 将细胞团重悬，4℃、500-1000g、10 min，收集细胞，弃上清。

3. 用预冷的IP Lysis/WashBuffer重悬细胞。每 1mg 细胞使用5-10μL IPLysis/Wash Buffer。同时加入PMSF等相应的抑制剂，混匀后置于冰上静置5-20 min（期间混匀几次）。

4. 4 ℃,12000 -16000 g,10 min离心收集上清液，置于冰上以备后续实验（或置于-80℃长期保存）。

血清样品：

一般建议建议用IP Lysis/Wash Buffer稀释血清样品至目标蛋白终浓度为50~150µg/mL，置于冰上备用（或置于-20 ℃长期保存）。

免疫复合物的制备

注意：样品所需的量和孵育时间均依赖于每个特定的抗体-抗原体系，因而可能需要优化才能得到最大产量。

以下实验方案针对2-10μg 亲和纯化的抗体，根据需要可以按比例放大。

1. 在离心管中，将每个样品的细胞裂解液与2-10μg 免疫沉淀抗体结合。每个免疫沉淀反应推荐的总蛋白量为500-1500μg。

2. 用IP Lysis/Wash Buffer将抗体以及制备好的样品稀释至300-500μL。

3. 在室温下孵育1-2 h，或4 ℃过夜，以形成免疫复合物。

免疫沉淀：

注意：为保证磁珠均匀分布，使用前通过反复颠倒或轻微涡旋混匀瓶中磁珠。

1. 将25 µL (0.25 mg) Protein A/G Magnetic Beads加入1.5 mL 离心管中。

2. 向磁珠中加入500 µL 预冷PBS，轻柔混匀。

3. 将离心管放入磁力架中收集磁珠到离心管的一边。去除上清。

4. 向离心管中加入200-500 µL IPLysis/Wash Buffer。颠倒离心管数次或轻微涡旋混匀1 min。用磁力架收集磁珠。去除上清。

5. 将抗原样品/抗体混合物加入装有磁珠的离心管中，保持混匀室温下孵育1-2 h。

6. 用磁力架收集磁珠，除去未结合的样品，保存以备分析。

7. 向离心管中加入500 µL IP Lysis/WashBuffer，轻柔混匀。收集磁珠，弃上清。再重复洗两次。

8. 低 pH洗脱：向离心管中加入100 µL ElutionBuffer。保持混匀在室温下孵育离心管5-10 min。通过磁力分离磁珠，保留含有目的抗原的上清。每100 µL 洗出液中加入10 µL NeutralizationBuffer来中和低pH。

9. 变性洗脱：向离心管中加入80-100 µL SDS-PAGE Sample Loading Buffer（1x），将样品置于100℃水浴或者金属浴中加热10 min。通过磁力架分离磁珠，保留含有目的抗原的上清。

储存条件

低温运输；

IP Lysis/Wash Buffer、Elution Buffer、Neutralization Buffer于4 ℃保存；

PMSF、Phosphataseinhibitor cocktail、SDS-PAGE SampleLoading Buffer 于-20 ℃保存。

产品优势

1. 适用本系列免疫沉淀系列所有磁珠

2. 兼容其他同类型免疫沉淀系列磁珠

3. 兼容其他免疫沉淀系列琼脂糖凝胶、琼脂糖磁珠。

注意事项

1. 进行实验操作之前，请务必认真阅读本操作说明书。

2. 请勿高速离心、干燥或冷冻磁珠，这些操作会导致磁珠聚集而降低结合能力。

3. IP实验中不同类型的抗体与抗原结合的亲和性是有区别的，抗体与抗原结合还会受到IP Lysis/Wash Buffer的影响，因此，如使用本试剂盒不能获得最佳的实验结果，可自行优化操作细节或者筛选及配制缓冲液进行实验。

4. 微球使用前应充分振荡均匀。微球应保存在储存溶液中，防止干燥。

5. 本产品仅供研究使用。