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产品信息:

产品简介：

       本试剂盒采用了特殊的离心吸附柱和缓冲液体系，可以从真菌或者植物中快速提取总RNA。只要25min左右即可完成提取，操作简单，使用方便。提取出的总RNA不含有蛋白和其他杂质，纯度极高。

      本真菌RNA快速提取试剂盒通用型强，兼容性好，可广泛使用于各类真菌或植物样本的提取。

储存事项：

1）本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。

2）试剂盒储存于低温（4℃或者－20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃－25℃）进行。

3）避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

产品特点：

1.不使用有毒的苯酚，氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。

2.简捷，单个样品操作一般可在25分钟内完成。

3.多次柱漂洗确保高纯度，OD₂₆₀/OD₂₈₀ 典型的比值高达 2.1～2.2，基本无 DNA 残留，

可用于RT-PCR，Northern-blot 和各种实验。

产品组分：

使用前必读：

1、实验过程使用的离心机均可在室温进行（4℃也可以），转速可以达到12,000rpm的传统台式离心机。

2、需要自备乙醇、β-巯基乙醇或者DTT和研钵。

3、样品处理量不能超过离心柱的处理能力，否则容易导致DNA残留或者RNA产量降低。

4、RLT、RLC和RW1中含有刺激性化合物，操作时务必戴手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

5、植物组织裂解是否充分直接影响到RNA 提取的质量和产量，本试剂盒中提供的裂解液RLT，主要成分为异硫氰酸胍，适用于大多数植物组织的裂解，但有些植物组织（例如玉米的乳白色胚乳）或丝状真菌，由于次级代谢产物较特殊，异硫氰酸胍使样品产生固化，导致RNA 无法提取，此时可以向我们索取另一种裂解液RLC，将解决该问题。

6、关于DNA的微量残留：

一般说来任何总 RNA 提取试剂在提取过程中无法完全避免 DNA 的微量残留（DNase 消化也无法做到 100%无残留），本公司的 RNA 提取产品，由于采取了本公司特殊的裂解液体系和离心管吸附柱技术，绝大多数 DNA 已经被清除，不需要 DNase 消化，可直接用于RT- PCR 和qPCR。个别特殊情况如 DNA 含量过于丰富造成残留或者要进行严格的mRNA 表达量分析荧光定量 PCR，我们建议在进行模板和引物的选择时：

1)选用跨内含子的引物，以穿过 mRNA 中的连接区，这样 DNA 就不能作为模参与扩增

反应。

2)选择基因组 DNA 和 cDNA 上扩增的产物大小不一样的引物对。

3)在步骤去蛋白液 RW1 漂洗前，直接在离心柱上进行 DNase I 柱上消化处理。购买 DNA 酶柱上消化试剂盒(货号：HRN0291)前可先索取具体操作说明书。

使用方法：

提示：

→第一次使用前请先在 Buffer RW，Buffer RW1中添加指定量的无水乙醇，并做好标记！

→在使用前加入10μL β-巯基乙醇或20μL的2M DTT到1mL Buffer RLT或Buffer RLC中，含有β-巯基乙醇或者DTT的裂解液可在室温下保存长达1个月。

一、真菌样品

1、称量50-100mg真菌组织样品。

2、迅速将称量好的样品放入液氮中，用研钵和研杵彻底研磨成粉末状，把样品粉末装入用液氮预冷的2mL离心管中，待液氮挥发后迅速进入步骤3.（保持冷冻状态，尽量不要让组织融化）。

3、加入450μL buffer RLT缓冲液，涡旋仪剧烈振荡20s。

4、组装好gDNA清除柱和收集管，将步骤3中的溶液添加到清除柱中，12,000rpm离心2min。小心将收集管中的上清转移到新的离心管中（小心不要碰到收集管中的沉淀物）。

5、向步骤4.中获得的上清中加入0.5体积的无水乙醇（约225μL），并用枪头混匀，快速进入下一步骤。（该步骤可能会产生沉淀，不用在意，不会对实验有影响）

6、步骤5.获得的溶液（大约650μL）转移到新的RNA吸附柱和收集管中，盖好盖子，12,000rpm离心15s，弃废液，收集管重复使用。

7、加入700μL的 Buffer RW1到离心柱中，盖好盖子，12,000rpm离心15s，弃废液，收集管重复使用。

8、加入500μL Buffer RPE到离心柱中，盖好盖子，12,000rpm离心15s，弃废液，收集管重复使用。

9、加入500μL Buffer RPE到离心柱中，盖好盖子，12,000rpm离心2min（较长时间的离心，确保RNA洗脱过程中没有乙醇残留）

*10、该步骤为可选择步骤，将吸附柱装填到全新的1.5mL离心管中，盖好盖子，12,000rpm离心1min，可完全去除残留的Buffer RPE。

11、将离心柱放置到全新的1.5mL离心管中，向离心柱的膜中央加入30-50μL的无

酶水，盖好盖子，12,000rpm离心1min，洗脱收集RNA。

说明：如果预期RNA产量＞30μg，另外再加入30-50μL的无酶水到离心柱中，重复步骤11，合并两次洗脱液；如果需要高浓度的RNA，建议将第一次的洗脱液加回到离心柱上，重复步骤11。

洗脱两遍RNA的洗脱液的RNA浓度高，分两次洗脱合并洗脱液的RNA产量比前者高15-30%，但是浓度要低，使用者根据需要进行选择。

二、植物样品

1、称量不超过100mg的新鲜植物样品

2、迅速将称量好的组织样品放入液氮中，用研钵和研杵彻底研磨成粉末状，把样品粉末装入用液氮预冷的2mL离心管中，待液氮挥发后迅速进入步骤3.（保持冷冻状态，尽量不要让组织融化）

3、加入450μL buffer RLT缓冲液，涡旋仪剧烈振荡20s

4、组装好gDNA清除柱和收集管，将步骤3中的溶液添加到清除柱中，12,000rpm离心2min。小心将收集管中的上清转移到新的离心管中（小心不要碰到收集管中的沉淀物）。

5、向步骤4.中获得的上清中加入0.5体积的无水乙醇（约225μL），并用枪头混匀，快速进入下一步骤。（该步骤可能会产生沉淀，不用在意，不会对实验有影响）

6、步骤5.获得的溶液（大约650μL）转移到RNA吸附柱和收集管中，盖好盖子，12,000rpm离心15s，弃废液，收集管重复使用。

7、加入700μL的 Buffer RW1到离心柱中，盖好盖子，12,000rpm离心15s，弃废液，收集管重复使用。

8、加入500μL Buffer RPE到离心柱中，盖好盖子，12,000rpm离心15s，弃废液，收集管重复使用。

9、加入500μL Buffer RPE到离心柱中，盖好盖子，12,000rpm离心2min（较长时间的离心，确保RNA洗脱过程中没有乙醇残留）

*10、该步骤为可选择步骤，将离心柱装填到全新的1.5mL离心管中，盖好盖子，12,000rpm离心1min，可完全去除残留的Buffer RPE。

11、将离心柱放置到全新的1.5mL离心管中，向离心柱的膜中央加入30-50μL的无酶水，盖好盖子，12,000rpm离心1min，洗脱收集RNA。

说明：如果预期RNA产量＞30μg，另外再加入30-50μL的无酶水到离心柱中，重复步骤11，合并两次洗脱液；如果需要高浓度的RNA，建议将第一次的洗脱液加回到离心柱上，重复步骤11。

洗脱两遍RNA的洗脱液的RNA浓度高，分两次洗脱合并洗脱液的RNA产量比前者高15-30%，但是浓度要低，使用者根据需要进行选择。

附：DNA酶柱上消化步骤

• 按照试剂盒步骤操作，直到完成步骤6。
• 取45ul DNase I buffer和5μL DNase I酶在离心管中轻轻吹打混匀成工作液（如果样品比较多，请按照比例放大配制工作液）。
• 向离心柱中加入350μL Buffer RW1到离心柱中，盖好盖子，12,000rpm离心30s，弃废液，收集管重复使用
• 向离心柱中加入50μL的DNase I工作液，室温（20-30℃）放置15min。注意：直接将工作液加入到膜的中央，溶液会自动扩散到四周。不要滴加到管壁或者其他无法接触到膜的位置。
• 向离心柱中加入350μL的Buffer RW1，盖好盖子，12,000rpm离心30s，弃废液，收集管重复使用。
• 接着按照步骤8完成后续操作

产品仅用于科研等非医疗用途！