价格:683
货号HRbio™ Hi-Fi High Fidelity DNA Polymerase 高保真DNA聚合酶
产品详情
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产品信息
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产品名称 |
产品编号 |
规格 |
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HRbio™ Hi-Fi High-Fidelity DNA Polymerase 高保真 DNA 聚合酶 |
HRF0082 |
100 U |
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HRF0083 |
500 U |
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HRF0084 |
1000 U |
产品描述
HRbio™ Hi-Fi High Fidelity DNA Polymerase 高保真DNA聚合酶是一款基于超嗜热原始Thermococcus kodakaraensis KOD1株的KOD DNA聚合酶的基础上开发的PCR用酶。该酶具有 3’→5’核酸外切酶活性，其具有较高的保真性是Taq DNA 聚合酶的 100 倍。酶溶液中添加了延伸因子使得该酶具有长片段扩增能力，扩增速度达到 15-30sec/kb ，扩增目的片段的长度可长达 1 8 kb。本产品配备了优化缓冲液，添加了 PCR 增强组分，使得该酶适用于复杂模板的扩增。扩增产物为平末端。
产品组分
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组分名称 |
规格 |
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HRF0082 |
HRF0083 |
HRF0084 |
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（100 U） |
（500 U） |
（1000 U） |
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HRbio™ Hi-Fi High-Fidelity DNA Polymerase 高保真DNA 聚合酶(2U/μL) |
50 μL |
250 μL |
250 μL×2 |
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2×Reaction PCR buffer （含 Mg2+ ） |
1 mL×3 |
1 mL×15 |
1 mL×30 |
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10mM dNTP |
100 μL |
500 μL |
1000 μL |
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6×DNA loading buffer |
1 mL |
1 mL×5 |
1 mL×10 |
产品应用
高保真 PCR；基因克隆；生成测序模板；高 GC 含量 PCR；长片段 PCR（长达 1 8 kb）；突变高通量 PCR
活性定义
用活性化的大马哈鱼精子 DNA 为模板/引物， 74℃ ，30 min 内，摄入 10 nmol 的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为 1 U。
运输和保存方法
冰袋运输。-20℃保存，有效期1年。
注意事项
1）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作；
2）本产品仅作科研用途！
推荐PCR反应体系（冰上配制）
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组分 |
体积（μL） |
终浓度 |
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ddH2O |
to 50 μL |
- |
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2×HRbio™ Hi-Fi PCR buffer (含 Mg2+ ) |
25 μL |
1× |
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10mM dNTP |
1 μL |
0.2 μM |
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DNA 模板 |
适量 |
- |
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Primer 正向 (10 μM) |
2.5 μL |
0.5 μM |
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Primer 反向 (10 μM) |
2.5 μL |
0.5 μM |
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HRbio™ Hi-Fi High Fidelity DNA Polymerase 高保真DNA聚合酶 (2 U/μL) |
0.5 μL |
1 U/50 μL |
【注】
1）试剂使用：使用前要充分解冻混匀。
2）聚合酶浓度：推荐使用 1 U/50 μL,可以在 0.5-2 U/50 μL 之间进行优化请勿超过2 U/50 μL。
3）聚合酶添加：为了防止聚合酶因 3’→5’外切酶活性降解引物，建议将聚合酶在最后一步加到反应体系中。
4）Mg2+终浓度： 体系终浓度为 1.5 mM。如有特殊需要，可用 50 mM MgCl2，以 0.2-0.5 mM 为间隔向上摸索。
5）高 GC 模板： 在体系中加入终浓度为 3%的 DMSO 可能有利于扩增。
不同模板的推荐使用量（50 μL 反应体系）：
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模板种类 |
扩增片段1kb-10kb |
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基因组 DNA |
50 ng-200 ng |
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质粒或病毒 DNA |
10 pg-20 ng |
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cDNA |
1-5 μL (不超过 PCR 反应总体积的 1/10) |
PCR扩增程序：有以下三种程序可选择，优先选择两步法程序。
两步法（优先推荐）
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循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
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预变性 |
94℃ |
2 min |
1 |
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变性 |
98℃ |
10 sec |
30-35 |
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延伸 |
68℃ |
30 sec/kb |
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终延伸 |
68℃ |
7 min |
1 |
三步法 （常规程序）
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循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
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预变性 |
94℃ |
2 min |
1 |
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变性 |
98℃ |
10 sec |
30-35 |
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退火 |
Tm |
30 sec |
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延伸 |
68℃ |
30 sec/kb |
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终延伸 |
68℃ |
7 min |
1 |
【注】
1）预变性温度和时间： 推荐温度： 94℃ ，时间： 2 min ，高 GC 含量模板 5- 10 min。
2）退火温度和时间： 可根据引物退火的温度。推荐退火时间 设置为 3 0 sec，可以在 10-30 sec 内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。
3）延伸温度和时间： 推荐温度： 68℃ 。时间： 30 sec/kb ，复杂模板根据实际情况可延长至 60 sec/kb。
4）扩增产物： 请将 PCR 扩增产物放置于-20℃保存，防止该酶降解扩增产物。扩增产物为平末端。