产品信息

产品描述

     通常使用蛋白质A/G琼脂糖用于从血清、细胞培养中分离抗体上清液或腹水，用于免疫沉淀和细胞或组织抗原的共免疫沉淀摘录。蛋白质A/G琼脂糖含有重组蛋白A/G，结合免疫球蛋白的IgG结合域蛋白质A和蛋白质G。蛋白质A/G含有五种蛋白质来自蛋白质A的Fc结合域和来自蛋白质A的两个Fc结合域G使其成为更通用、更方便的研究和纯化免疫球蛋白。

储存条件

在4°C下储存2年。

使用说明

1.培养培养细胞（80-90%汇合单层在100 mm细胞培养板中或大约2-5 x 107烧瓶中的悬浮细胞）。

2.添加3毫升冰冷IP裂解/洗涤缓冲液至细胞单层，并在4℃下培养10分钟。对于悬浮细胞，添加Biolinkedin®IP溶解/洗涤缓冲液至15mL溶液中洗涤的细胞颗粒锥形离心管。

3.通过21号导管反复抽吸破坏细胞测量针并转移至15毫升锥形管离心管。

4.用额外的1.0毫升冰镇水清洗细胞培养板Biolinkedin®IP裂解/洗涤缓冲液并与原始摘录。

5.通过在10000 x g下离心分离颗粒细胞碎片在4°C下10分钟。将上清液转移到新鲜的15°C溶液中冰上锥形离心管预澄清液（可选步骤）通过添加1.0µg适当的对照IgG（正常小鼠、大鼠、兔或山羊IgG，对应于原生动物的寄主种类抗体），以及20-50µl的再悬浮蛋白质A/G琼脂糖的体积。在4°C下孵育10分钟0.5小时

6.在2500转/分的转速下通过离心分离颗粒珠（约1000 x g）在4°C下持续5分钟。将上清液（细胞裂解液）转移到新鲜的15毫升溶液中冰上锥形离心管。

7.转移1毫升上述细胞裂解物，或约100-500µg总细胞蛋白，至1.5毫升微量离心管。添加1-10微升（即0.2-2微克）一级抗体（最佳抗体浓度）应通过滴定法测定）并培养1小时在4°C下工作1小时。

8.添加20µl再悬浮体积的蛋白质A/G琼脂糖。盖上试管并在摇杆上4°C下孵化工作台或旋转装置在阳光下工作1小时。

9.在2500℃下离心收集免疫沉淀转速（约1000 x g），在4°C下持续5分钟。小心地抽吸并丢弃上清液。

10.用1 mL Biolinkedin®IP清洗小球4次溶解/洗涤缓冲液（更严格）或PBS（更少严格），每次重复离心步骤在上面。

11.最终清洗后，抽吸并丢弃上清液和再次使用40µl的1x电泳样品制备粒剂缓冲器。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2）本产品仅作科研用途！