价格:389
货号Protein A/G琼脂糖凝胶Protein A/G Agarose Beads
产品详情
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产品信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 |
|
Protein A/G琼脂糖凝胶 Protein A/G Agarose Beads |
HRD2101 | 1mL |
| HRD2102 | 5mL |
产品描述
Protein A/G 琼脂糖凝胶是以琼脂糖凝胶为介质，以重组 Protein A/G 蛋白为配体，具有较高的物理化学稳定性，配基不易脱落，寿命长，使用方便。重组 Protein A/G 蛋白包含 Protein A 的 5 个免疫球蛋白结合区域和 Protein G 的 2 个结合区域，结合能力较单一的 Protein A 和 Protein G 有很大提高。本产品广泛应用于细胞裂解物、细胞分泌上清、血清、腹水等样品中抗原的免疫沉淀（IP）或免疫共沉淀（Co-IP），也可以用于抗体的纯化。
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名称 |
特性 |
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成分 |
重组蛋白A/G |
| 矩阵 |
4%交联琼脂糖 |
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磁珠粒度 |
30-100µm |
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浓度 |
凝胶固体体积约是悬浊液体积的25% |
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结合力 |
≥ 25mg 人IgG/mL珠粒 |
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应用 |
IP，Co-IP, ChIP,RIP和抗体的纯化等 |
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储存条件 |
在4°C下储存2年 |
储存条件
在4°C下储存2年。
使用说明
I.样本处理部分
一、贴壁细胞样品
1.倒弃培养基，PBS溶液轻轻清洗细胞2-3次。
2.将细胞收集到1.5mL的离心管中，按一定比列加入IP Lysis/Wash buffer（参看表1），同时加入PMSF或其他相应的蛋白酶抑制剂，混匀后冰上静置5-20min（中间可以多次混匀）。
3.离心收集上清液（4℃，12000-16000×g，10min），置于冰上，以备后续实验（长期不用，可放置-80℃保存）。
| 培养皿大小/表面积 | IP Lysis/Wash Buffer体积 |
| 100mm培养皿 | 500-1000 μL |
| 60mm培养皿 | 100-300 μL |
| 6孔板 | 100-200 μL |
表1
二、悬浮细胞样品
1.离心收集细胞（4℃，500-1000×g，10min），弃上清。
2.PBS溶液重悬细胞团，4℃，500-1000×g，5min再次收集细胞，弃上清。
3.预冷的IP Lysis/Wash Buffer重悬细胞，每50mg细胞用500μL IP Lysis/Wash buffer，同时加入PMSF或其他相应的蛋白酶抑制剂，混匀后冰上静置5-20min（中间可以多次混匀）
4.离心收集上清液（4℃，12000-16000×g，10min），置于冰上，以备后续实验（长期不用，可放置-80℃保存）。
三、血清样本
将IP Lysis/Wash buffer稀释血清样本，使目的蛋白的终浓度在50-150μg/mL之间，放置冰上备用（长期保存放-20℃）
II.免疫沉淀部分
使用前请先充分混匀凝胶，确保凝胶的分布均匀。
1.取20-50μL 的Protein A/G 琼脂糖凝胶于1.5mL离心管中。
2.凝胶中加入500μL的预冷PBS，轻轻混匀。
3.装有凝胶的离心管离心5min（1000rpm）,收集凝胶到离心管底部，去除上清。
4.离心管中加入200-500μL IP Lysis/Wash buffer，充分混匀1min后，离心管离心5min（1000rpm）,收集凝胶到离心管底部，去除上清。
5.将制备好的抗原样品/抗体混合物样品加入装有凝胶的离心管中，室温孵育1-2h（或4℃，2-4h）。
6.离心1000rpm，5min收集凝胶，去除未结合的样品，保存以备分析。
7.向离心管中加入1000µL IP Lysis/Wash Buffer，轻柔混匀5-10min。收集凝胶，弃上清。再重复洗两次。
8.变性洗脱：向离心管中加入 80∽100µL SDS-PAGE Sample Loading Buffer（1×），将样品置于 100℃水浴或者金属浴中加热 10min。通过离心分离凝胶，保留含有目的抗原的上清。
注意：如需要保持蛋白活性，可采用以下方式洗脱：
低pH洗脱：向离心管中加入 100µL Elution Buffer。保持混匀在室温下孵育离心管 5∽10min。通过离心分离凝胶，保留含有目的抗原的上清。每 100µL 洗出液中加入20µL Neutralization Buffer 来中和低 pH。
注意事项
1）IP 实验中不同类型的抗体与抗原结合的亲和性是有区别的，抗体与抗原结合还会受到 IP Lysis/Wash Buffer 的影响，因此可自行优化操作细节或者筛选及配制缓冲液进行实验。
2）琼脂糖凝胶使用前应充分振荡均匀。凝胶应保存在储存溶液中，防止干燥。
3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
4）本产品仅作科研用途！
附：常见问题
1. 抗原没有免疫沉淀下来
① 样品中所含的抗原过少，不足以被检测
建议：通过 SDS-PAGE 或蛋白免疫印迹验证裂解液中蛋白的表达和/或裂解效率； 如果需要，加大样品量
② 抗体无法结合抗原
建议：选择另一种特异性抗体，或者选择另一种识别不同抗原表位的抗体。
③ IP Lysis/Wash Buffer 中的成分干扰了抗原与抗体的结合
建议：使用其它缓冲液进行免疫沉淀和漂洗（例如，含有 0.5% CHAPS 的 TBS）
2. 获得的蛋白量低
① 蛋白质被降解
建议：加入蛋白酶抑制剂
② 所使用的凝胶量不够
建议：提高捕获免疫复合物所使用的凝胶量
③ 样品中的目标蛋白量不够
建议：提高抗原样品量
3. 多条非特异条带
有非特异性的蛋白结合在凝胶上
建议：在 IP Lysis/Wash Buffer 中加入 50∽350mM NaCl。加大洗脱力度和次数。
4. 凝胶易粘附管壁
建议：使用低吸附率的耗材进行凝胶操作。