• Minute™ 细胞质和细胞核分离试剂盒 SC-003_CN.pdf

产品信息

产品描述

     Minute 细胞质和细胞核分离试剂盒由细胞质提取缓冲液和细胞核提取缓冲液，离心管柱和2.0ML收集管组成。本试剂盒可快速从培养的哺乳动物细胞，原生质体（植物，细菌，酵母和真菌）中分离天然的胞质和胞核蛋白，时间<15分钟。

应用

      本试剂盒可以快速分离天然的胞质和胞核蛋白，可应用于SDS-PAGE, immunoblottings, ELISA, IP，蛋白质定位，凝胶迁移分析，2-D等其他应用。

使用说明

A． 悬浮细胞样品（包括植物，细菌，酵母和真菌制备的原生质体）

1. 500Xg，3 分钟低速离心收集细胞，用预冷的 PBS 清洗一次
2. 将细胞转移到 1.5ml 离心管中，500Xg 离心 1 分钟，弃去上清。
3. 按表格 1 加入适量的胞浆提取缓冲液（请注意样品及裂解液的比例，以达到最佳效果）,涡旋大力震荡 15秒,冰上孵育 5 分钟（注：如果需要获取特别纯的核蛋白，需要延长此步孵育时间）,混匀.接转胞质胞核分离步骤。

B. 贴壁细胞

1. 贴壁细胞生长至融合度 90-100%，将预冷的 PBS 直接加入细胞培养板，培养皿或培养瓶中清洗细胞两次，吸去上清。
2. 按表格 2 将适量的胞浆提取缓冲液均匀的加入整个器皿表面，冰上静置 5 分钟（注：如果需要获取特别纯的核蛋白，需要延长此步孵育时间）。用吸头吹打几次后转移到预冷的 1.5ml 离心管中。涡旋大力震荡 15 秒。接转胞质胞核分离步骤。（请注意样品及裂解液的比例，如浓度较低请减少裂解液使用量）

胞质胞核分离步骤

1. 4℃，最高速(14000-16000Xg)离心 5 分钟
2. 将上清液（上清为胞浆组份）转移到一个新的预冷的 1.5ml 离心管中。将沉淀（可选优化：用 0.5ml 预冷PBS 重悬，8000Xg，离心 3-5 分钟清洗沉淀可以减少胞浆蛋白污染）中加入适量的胞核提取缓冲液，涡旋大力震荡 15 秒，冰上孵育 1 分钟。然后重复震荡 15 秒，冰上孵育 1 分钟四次。（如核蛋白提取浓度低，可适当延长每次孵育及震荡时间）
3. 迅速将核提取物转入到预冷的离心管套管中，14000-16000Xg，离心 30 秒。弃掉离心管柱。将核蛋白储于-80℃。一般产量 1.5-2.5mg/ml。

储存条件

4℃下储存。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2）本产品仅作科研用途！