• 说明书丨HRQ0654-Gel & PCR Cleanup Kit 胶回收及PCR产物纯化试剂盒.pdf

产品信息:

产品描述：

      本试剂盒采用了特殊的离心吸附柱和缓冲液体系，可以同时用于胶回收和PCR产物纯化回收，该试剂盒包含两套回收方案，如需从多个条带中回收某一特定条带，可采用胶回收步骤，需将目的DNA片段从琼脂糖凝胶上切下，溶胶后再回收DNA片段。如只需从PCR产物或酶促反应液中回收纯化DNA片段，可采用PCR Cleanup回收步骤。一个试剂盒满足多种需求，简单方便。

产品组分：

产品特点：

1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。

2.使用了优质溶胶液，不含传统溶胶液的碘化钠和高氯酸盐，不抑制回收后酶切、连接克隆等下游反应。

3.Buffer QG和Buffer PB加酚红调制成为了黄颜色，便于观察溶胶效果和监测pH值变化从而达

到最佳结合效果，大大提高回收效率。

4.改进的溶胶液Buffer QG和Buffer PB配方，大大提高了缓冲能力和稳定性，即使样品变化很大也能将PH缓冲在最佳结合范围内。

5.快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。

运输和保存方法：

1）本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。

2）试剂盒储存于低温（4℃或者-20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃－25℃）进行。

3）避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

注意事项：

1.所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。

2.溶胶液Buffer QG和Buffer PB中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或者生理盐水冲洗。

3.回收纯化的DNA片段一般在70bp到40kb之间，过长、过短片段的回收效率迅速降低。

4.回收DNA的量和起始DNA的量、洗脱体积、DNA片断大小有关。一般1-15μg， 100bp-5kb的DNA片段，回收率可高达80％。

5.切胶回收时，紫外灯观察对DNA片段有损坏作用，应该尽可能使用能量低的长波紫外线，并且尽可能的缩短紫外线下处理的时间。

6.Buffer EB不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱， 但应该确保pH大于7.5， pH过低影响洗脱效率。用水洗脱，DNA片段应该保存在-20℃。DNA片段如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。

7.本产品仅作科研用途！

使用方法：

提示：

→第一次使用前请先在 Buffer PE中添加指定量的无水乙醇，并做好标记！

一、胶回收操作步骤

1、在长波紫外灯下，用干净刀片将所需回收的DNA条带切下，尽量切除不含DNA的凝胶，得到凝胶体积越小越好。

2、将切下的含有DNA条带凝胶放入1.5ml离心管，称重。

（先称一个空1.5ml离心管重量，然后放入凝胶块后再称一次，两次重量相减，得到凝胶的重量。）

3、加3倍体积溶胶液Buffer QG。

例如凝胶重为100mg，其体积可视为100μL，则加入300μL溶胶液Buffer QG。

如果凝胶浓度大于2％，应加入6倍体积溶胶液Buffer QG。

4、56℃水浴放置10分钟（或直至胶完全溶解）。每2-3分钟涡旋震荡一次帮助加速溶解。

5、将上一步所得溶液加入吸附柱中（吸附柱放入收集管中），室温放置1分钟，12,000rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液。

6、加入750μL的Buffer PE（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000rpm 离心30秒，弃掉废液。

7、加入750μL的Buffer PE，12,000rpm离心30秒，弃掉废液。

8、将吸附柱放回空收集管中，12,000rpm离心2分钟，尽量除去残留的溶液，以免残留乙醇抑制下游反应。

9、取出吸附柱，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加50μL洗脱缓冲液Buffer EB（Buffer EB事先在 65-70℃水浴中加热效果更好），室温放置2分钟，12,000rpm 离心1分钟。如果需要较多量DNA，可将得到的溶液重新加入吸附柱中，离心1分钟。

▲注意：洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是最小体积不应少于25μL，体积过小降低DNA洗脱效率，减少产量。

二、PCR产物纯化回收操作步骤

1、按照5:1（结合液Buffer PB：样品）的比例，将结合液Buffer PB加入到PCR扩增产物或者酶切产物中，充分混匀。（例如50μL的PCR扩增产物或者酶切后产物加入250μL结合

液 Buffer PB，充分混匀）。

2、将上一步所得溶液加入吸附柱中（吸附柱放入收集管中），室温放置1 min，12,000 rpm 离心 1 min，弃滤液。

3、加入600μL的Buffer PE（请先检查是否已加入无水乙醇!）到离心柱中，12,000 rpm 离心30 sec，弃滤液。

4、再加入600μL的Buffer PE重复一遍，12,000 rpm 离心30 sec，弃滤液。

5、将吸附柱放回空收集管中，12,000 rpm 离心2 min，尽量除去漂洗液Buffer PE，以免残留的乙醇抑制下游反应。

6、取出吸附柱，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加50µL洗脱缓冲液Buffer EB（Buffer EB事先在 80°C-90°C 水浴中预热可提高产量），室温放置 2 min，12,000 rpm离心 1 min，弃吸附柱，纯化产物即在离心管中。

▲注意1：为了增加DNA的回收效率，可将得到的洗脱液重新加入到吸附柱中，室温放置1min后，12,000 rpm离心1 min，洗脱两遍可以提高大约10%的浓度。

▲注意2：洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是最小体积不应少于25μL，体积过小降低DNA洗脱效率，减少产量。

产品仅用于科研等非医疗用途！