• 说明书丨HRF0403-DpnI.pdf

产品信息

产品描述

      DpnI是一种限制性内切酶，可特异性切除甲基化的DNA链。常用于PCR后模板DNA的切除。实际应用中，通常DNA片段进行点突变后，要区分原始DNA和突变DNA，由于原来的模版质粒来源于常规大肠杆菌，是经Dam甲基化修饰的，对DpnI敏感而被切碎（DpnI识别序列为甲基化的GATC，GATC普遍存在于各种类型的质粒中），体外合成的带突变序列的质粒由于没有甲基化而不被切开，因此在随后的转化中得以成功转化，即可获得带有突变质粒的克隆。

      本公司生产的DpnI酶是通过基因重组表达获得的酶，适用于质粒 DNA、PCR 产物或基因组 DNA 等的快速酶切。

酶切位点

5'  G  A^m6 ↓  T      C  3'
3'  C  T      ↑  A^m6  G  5'

注意事项

1）可在5~15 min 内完成反应；

2）最适反应温度为37℃；

3）对于被CpG甲基化的DNA，剪切可能受阻；

4）对于被 EcoBI 甲基化的DNA，剪切可能受阻；

5）失活条件为80℃温浴20min

6）3h温浴未表现星号活性，更长时间酶切可能出现星号活性

7)本产品仅作科研用途！

运输和保存方法

冰袋运输。-20℃保存，有效期12个月。

产品组成

使用方法

1. DNA快速酶切过程

1）在冰上配制以下反应体系：

3）轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；

4）37℃温育15 min（质粒），或 30~60 min（基因组 DNA）；

5）80℃温育 20 min 即可使酶失活，停止反应（可选）；

6）如果使用 10×Color Reaction buffer进行酶切反应，得到的产物可以直接进行上样电泳。

2. 双酶切或多酶切

• 每种快速内切酶的用量为1μl，并根据需要适当扩大反应体系；
• 所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10；
• 如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同，应先以最适温度低的酶开始酶切，再添加最适温度较高的酶，在其最适反应温度下进行酶切反应。

3. 适用于质粒的扩大反应体系

注：如果总反应体系大于 20 μl，应适当增加温育时间，尽量使用水浴、金属浴或沙浴。