价格:1,500
货号二氢黄酮醇还原酶（Dihydro flavonol reductase，DFR）试剂盒
产品详情
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产品信息
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产品名称 |
测定方法 |
产品编号 |
规格 |
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二氢黄酮醇还原酶（DFR）试剂盒 |
分光光度法 |
HRK0577 |
50管/24样 |
正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
二氢黄酮醇还原酶是类黄酮合成途径中的一个关键酶，在决定植物的花色、叶色、果色和其他经济器官的色泽及其营养品质方面起着重要作用。
测定原理
二氢黄酮醇还原酶作用于二氢槲皮素产生儿茶素，可与香草醛缩合形成红色化合物，在500nm处有特征吸收峰。
需自备的仪器和用品
研钵、低温离心机、震荡仪、氮吹仪、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、水浴锅、无水乙醇、乙酸乙酯。
试剂组成和配制
提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体30mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体3mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加5mL蒸馏水溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂四：液体40mL×2瓶，4℃避光保存。
酶液提取
1.组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。10000g ，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2.液体：直接检测。
测定操作表
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对照管 |
测定管 |
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酶液（μL） |
200 |
200 |
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试剂一（μL） |
700 |
600 |
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试剂二（μL） |
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100 |
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试剂三（μL） |
100 |
100 |
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混匀，30℃反应30min |
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乙酸乙酯（μL） |
1000 |
1000 |
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37℃震荡10min，取上层溶液，N2吹干 |
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无水乙醇（μL） |
500 |
500 |
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充分震荡 |
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试剂四(μL) |
1500 |
1500 |
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混匀，25℃静置10min，于1mL玻璃比色皿测定500nm处吸光值A。分别记为A对照管和A测定管，△A=A测定管-A对照管 |
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酶活性计算公式
标准曲线：y=0.0184x+0.0002，R2=0.999
（1）按照蛋白浓度计算
酶活性定义：在30℃，pH7.5条件下，每毫克蛋白每分钟分解二氢槲皮素产生1mmol儿茶素所需的酶量为一个酶活力单位。
DFR活性（mmol/min/mg prot）=（△A-0.0002）÷0.0184×V反总÷（V样×Cpr）÷T÷2= 9.06×（△A-0.0002）÷Cpr
（2）按照样本质量计算
酶活性定义：在30℃，pH7.5条件下，每克组织每分钟分解二氢槲皮素产生1mmol儿茶素所需的酶量为一个酶活力单位。
DFR活性（mmol/min/g 鲜重）= （△A-0.0002）÷0.0184×V反总÷（V样×W÷V样总）÷T÷2= 9.06×（△A-0.0002）÷W
（2）按液体体积计算
酶活性定义：在30℃，pH7.5条件下，每毫升液体每分钟分解二氢槲皮素产生1mmol儿茶素所需的酶量为一个酶活力单位。
DFR活性（mmol/min/mL）=（△A-0.0002）÷0.0184×V反总÷V样÷T÷2= 9.06×（△A-0.0002）
V反总：反应总体积，1mL；V样：反应体系中样本体积，0.1mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W，样本质量，g；T：反应时间，30min
注意事项
本产品仅作科研用途！