• 说明书丨HRN0391-RNAstore Blood RNA Kit(For RNAlater Treated Blood).pdf

产品信息

产品描述

      RNAstore血液RNA试剂盒用于从储存在RNAfixer（与RNAlater相同）溶液中的血液样本中分离总RNA。血液样本可以立即处理，也可以在提取RNA之前，在室温下或在-20℃下长时间储存在RNA固定剂溶液（随试剂盒提供）中。试剂盒RNA分离程序由两部分组成：

1.在基于胍的溶液中进行细胞裂解并初步纯化

苯酚/氯仿萃取法提取RNA

2.在玻璃纤维过滤器上通过固相萃取最终纯化RNA。这个过程完全去除污染物和酶抑制剂，产生高质量的RNA。使用该试剂盒纯化的RNA可用于qRT PCR等应用。

运输和保存方法

1）本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

2）所有的溶液应该是澄清的，如果环境温度低时溶液可能形成沉淀，此时不应该直接使用，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清。

3）不合适的储存于低温（4℃或者－20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃－25℃）进行。

4）避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作；

2）本产品仅作科研用途！

使用方法

提示：

→第一次使用前请先在漂洗液RW瓶、漂洗液WB和70%乙醇瓶中加入指定量无水乙醇!

1.使用标准方法采集血样

按照标准程序在含有抗凝剂的试管中采集血样。推荐使用钾或乙二胺四乙酸钠抗凝剂，但肝素和柠檬酸盐也适用于该程序。其他抗凝剂尚未进行检测。

2.（可选）将300–500µl血液添加到1.3 mL RNAffixer（RNAflater）溶液中

a.轻轻翻转采集管几次，混合血样。。

b.将300–500µl抗凝血液添加到2毫升微导管（不包括在试剂盒中）中的1.3毫升RNA固定剂中。将试管倒置几次，彻底搅拌。

一旦样品与RNA固定剂混合，可在环境温度下储存最多3天。在环境温度下长时间储存经RNA固定剂处理的样品将导致RNA产量和质量逐渐下降。与RNAfixer混合的样品也可以在-20°C下长期储存。

3.RNAfixer溶液中的样品：离心并去除上清液

a.在微型离心机中离心样品1分钟。血细胞和血浆蛋白将形成一个大的棕色或红棕色颗粒，沿着管的侧面向上涂抹，上清液可能是淡粉色、棕色或无色（但通常是浑浊的）。

b.通过抽吸或倾倒去除并丢弃上清液。

吸入上清液时，确保彻底清除所有液体，包括细胞颗粒正上方的部分，该部分可能更浑浊，并且可能含有一些白色颗粒物质。注意.这种物质不是离心后未经处理的全血中的“棕黄色外壳”部分。

如果通过倾倒去除上清液，用纸巾轻轻敲打倒置管的边缘，去除所有残留液体。

清除管盖内部的任何液体。

4.在800μl裂解液和50μl醋酸钠缓冲液中裂解血细胞。

a.如果血样未储存在RNAfixer溶液中，则通过轻轻翻转收集管几次进行混合。

b.将800μl裂解液和50μl醋酸钠缓冲液添加到2毫升微导管中的300-500μl抗凝全血中。

c.剧烈旋转以溶解血细胞。倒置试管，确保溶液均匀。在RNAfixer中稳定下来的样本需要更剧烈的旋转，以重新悬浮和溶解细胞。

5.用500μl水饱和苯酚：氯仿（5:1）萃取。

a.向细胞裂解液中加入500μL水饱和苯酚：氯仿（5:1），剧烈摇动或旋转30秒。注：如果添加500μL苯酚：氯仿会导致试管太满，无法充分混合，则可以使用250μL苯酚：氯仿。或者将其分成两个微管进行提取。

b.将混合物在室温下储存5分钟。

c.在室温下离心1分钟，以分离水相和有机相。离心后，水相可能呈现浑浊或透明。

6.在新鲜的2毫升试管中回收水相。

将含有RNA的水相（上层）转移到一个新的2毫升试管中（试剂盒中未提供）。如果样品被拆分为苯酚：氯仿萃取，则将水相收集到一根试管中。

通常，水相体积约为1–1.2毫升。

避免将有色物质从含有血红素和蛋白质的有机（较低）相转移。放弃较低阶段。

注：如果水相体积小于800μl，请参见第5页附录I.有机萃取后水相回收困难。

7.向每个样品中加入600μl 100%乙醇，充分混合。

在苯酚:氯仿萃取后回收的每管水相中,添加600μl（~1/2体积）100%乙醇,并短暂但彻底地旋转。

如果需要，然后可以非常短暂地（约1秒）离心试管，以收集试管盖周围的液体。

8.将高达700µl的混合物转移到置于2 ml收集管（提供）中的RNA结合柱中。

9.以最大速度离心1分钟。

10.抽吸并丢弃滤液，重复使用收集管。

11.重复步骤8-10，直到剩余样品转移到RNA结合柱。

12.添加350μl缓冲液RW1。

13.以最大速度离心1分钟。

14.抽吸并丢弃滤液，重复使用收集管。

15.对于每个RNA结合柱，制备DNA酶I消化反应混合物，如下所示：

每制备10倍的缓冲液体积,DNA酶I缓冲液45μl 450μl

无核糖核酸酶DNA酶I 5μl 50μl,总体积50μl 500μl

重要提示：

DNA酶I非常敏感，容易发生物理变性。请勿旋转DNA酶I混合物。将试管倒置，轻轻搅拌。

在RNA分离之前，新鲜制备DNA酶I储备溶液。

标准DNA酶缓冲液与膜上DNA酶I消化不兼容。使用其他缓冲液可能会影响RNA与基质的结合，并可能降低RNA产量和纯度。

所有步骤必须在tem室进行。