价格:700
货号蔗糖磷酸合成酶（Sucrose phosphate synthase，SPS）试剂盒
产品详情
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产品信息
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产品名称 |
测定方法 |
产品编号 |
规格 |
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蔗糖磷酸合成酶（SPS）试剂盒 |
分光光度法 |
HRK1523 |
50管/24样 |
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义
蔗糖不仅是重要的光合产物，也是植物体内运输的主要物质，还是碳水化合物的贮存形式之一。SPS（EC 2.4.1.14）以果糖-6-磷酸为受体，形成的蔗糖磷酸在蔗糖磷酸酶的作用下形成蔗糖。一般把蔗糖磷酸酯合成酶-蔗糖磷酸酶系统看作是蔗糖合成的主要途径。
测定原理
蔗糖磷酸合成酶催化果糖-6-磷酸形成蔗糖磷酸，蔗糖磷酸与间苯二酚反应可呈现颜色变化，在480nm下有特征吸收峰，酶活力大小与颜色的深浅成正比。
需自备的的仪器和用品
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水
试剂的组成和配制
提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体4mL×1瓶，-20℃保存；
试剂二：1000μg/mL蔗糖溶液10mL×1瓶，4℃保存；
试剂三：液体3mL×1瓶，4℃保存；
试剂四：液体40mL×1瓶，4℃保存；
试剂五：液体12mL×1瓶，4℃避光保存；
样品测定的准备
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤
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试剂名称（μL） |
测定管 |
对照管 |
标准管 |
空白管 |
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样本 |
30 |
30 |
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蒸馏水 |
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150 |
150 |
180 |
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试剂二 |
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30 |
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试剂一 |
150 |
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混匀，25℃准确水浴10min
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试剂三 |
50 |
50 |
50 |
50 |
沸水浴中煮沸10min左右（盖紧，以防止水分散失），冷却
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试剂四 |
700 |
700 |
700 |
700 |
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试剂五 |
200 |
200 |
200 |
200 |
混匀，沸水浴30min，冷却后， 480nm下测定各管吸光值。标准管和空白管只要做一管。每个测定管需要设一个对照管。
SPS活力单位的计算
1、按照蛋白浓度计算
单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。
SPS活性(μg /min/mg prot)= C标准管×V1×（A测定管-A对照管)÷（A标准管-A空白管)÷(V1×Cpr)÷T=100×（A测定管-A对照管)÷（A标准管-A空白管)÷Cpr
2、按照样本鲜重计算
单位定义：每g组织每分钟催化产生1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。
SPS活性(μg /min /g鲜重) = C标准管×V1×（A测定管-A对照管)÷（A标准管-A空白管)÷(W×V1÷V2)÷T=100×（A测定管-A对照管)÷（A标准管-A空白管)÷W
C标准管：标准管浓度，1000μg/mL；V1：加入反应体系中样本体积，0.03mL； V2：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；T ：反应时间：10min。
注意事项
本产品仅作科研用途！